Facteur antinucléaire (ANF). Facteur antinucléaire : ce que montre l'analyse Norme du facteur antinucléaire

Appartenant au groupe des grandes collagénoses, qui se caractérise par des lésions diffuses du tissu conjonctif et des vaisseaux sanguins. Le diagnostic précoce de cette pathologie est un problème sérieux, car le LES peut débuter sous le "masque" d'autres maladies. Le LED étant une maladie auto-immune, son mécanisme manifestations cliniques, selon les concepts modernes, s'explique à partir des positions suivantes :

• les complexes immuns circulants (CIC), qui comprennent des anticorps antinucléaires, se déposant dans la liaison microcirculatoire, entraînent le développement d'une vasculopathie et de lésions tissulaires ;
• les auto-anticorps dirigés contre les cellules sanguines entraînent une leuco-, une lymphothrombopénie et une anémie ;
• les anticorps antiphospholipides conduisent au développement du syndrome des antiphospholipides (APS).

Les méthodes modernes d'immunologie diagnostic de laboratoire permettent d'identifier tous les composants de la pathogenèse du LES et donc, avec une précision extraordinaire, de près de 100 %, de vérifier le diagnostic de la maladie. Dans le même temps, la présence de tout changement dans les analyses permet de les interpréter uniquement en tenant compte du tableau clinique individuel.

Il convient de noter que l'ancienne méthode de diagnostic du LES par la présence de cellules LE dans le sang n'a pas résisté à l'épreuve du temps, montrant une sensibilité et une spécificité extrêmement faibles, et a donc été abandonnée. Les cellules LE ne sont même pas incluses dans les critères SLE.

Les principaux marqueurs du LED sont :

Indications pour la nomination d'un test sanguin pour les marqueurs du lupus érythémateux disséminé

• lupus cutané;
• lupus médicinal;
• purpura thrombocytopénique;
• érythrodermie;
• lésions hépatiques graves;
• le syndrome CREST ;
• polymyosite;
• dermatomyosite;
• chronique arthrite juvénile;
• hépatite auto-immune;
• cholangite sclérosante;
• polyneuropathie;
• myélite;

Comment est la procédure ?

Le prélèvement sanguin est effectué à partir de la veine cubitale à jeun le matin.

Préparation à l'analyse

Anticoagulant lupique

L'anticoagulant lupique (AL) est l'un des tests de dépistage et de confirmation importants pour le diagnostic du SAPL. Les VA se forment dans le corps à la suite du développement de processus auto-immuns après des influences infectieuses et suppriment la réaction de conversion de la prothrombine en thrombine dans le sang. Lorsque ces anticorps sont détectés dans le sang en allongeant les tests de coagulation, ils sont définis comme « anticoagulant lupique ».

Résultat positif:

• tumeurs;

facteur antinucléaire

Facteur antinucléaire sur la lignée cellulaire HEp-2 (ANF HEp-2, titres ; ANA IF, titres). Un résultat ANF positif est noté chez plus de 90% des patients atteints de LED et de formes cutanées de cette maladie, sclérodermie, connectivite mixte, syndrome de Sjögren. Le résultat du dosage de l'ANF est le titre, qui est la valeur de la dilution finale du sérum, qui conserve une fluorescence importante du noyau. Plus le dénominateur de la fraction est élevé, plus la dilution du sérum est importante, plus il y a d'anticorps dans le sérum du patient. La sensibilité de ce test pour le LES est de 95 %.

Titres élevés ANF (1/640 et plus) :

• forte probabilité de systémique maladie rhumatismale;
• risque élevé de maladie hépatique auto-immune;
• une augmentation des titres ANF en dynamique indique une exacerbation d'une maladie systémique;
• dans le LES, le titre est corrélé à la sévérité de la maladie et diminue avec un traitement efficace.

Faibles titres ANF (jusqu'à 1/160):

• chez 1 à 2 % des individus en bonne santé ;
• chez les proches de patients atteints de maladies systémiques ;
• de nombreuses maladies auto-immunes, infectieuses et oncologiques.

Anticorps contre les nucléosomes

Les anticorps nucléosomiques (NCA) sont parmi les premiers à se former dans le corps au cours du développement du LED. Les titres de NCA sont en corrélation avec l'activité de la maladie. La spécificité de ces auto-anticorps pour le diagnostic du LES est supérieure à 95 %.

Interprétation des résultats d'analyse

Teneur élevée en anticorps contre les nucléosomes (positif) :

• lupus médicinal;
• LED actif, accompagné de néphrite.

• faible probabilité de LED ;
• faible risque de lésions rénales dans le LES.

Anticorps de la classe IgG contre l'ADN double brin

La présence d'anticorps de la classe IgG dirigés contre l'ADN double brin (anti-dsDNA IgG ; anti-dsDNA IgG) est hautement spécifique du LED, dans une moindre mesure - dans d'autres maladies diffuses du tissu conjonctif ou LED d'origine médicamenteuse. La sensibilité du test pour le LED est de 85 %. La détermination quantitative des anticorps IgG anti-dsDNA est la plus appropriée pour surveiller l'état, le pronostic et le contrôle du traitement chez les patients atteints de LES, car elle est en corrélation avec son activité et la sévérité de la glomérulonéphrite.

Déchiffrer le résultat de l'analyse

Niveau supérieur:

• infection causée par le virus Epstein-Barr;

Descendre d'un niveau:

• norme.

Anticorps contre la cardiolipine IgG

Les anticorps IgG anticardiolipine (aCL IgG) sont l'un des types d'anticorps antiphospholipides auto-immuns impliqués dans la pathogenèse du syndrome des antiphospholipides. Leur présence dans le sang se manifeste par l'allongement des tests du coagulogramme dépendant des phospholipides (prothrombine, APTT), ce que l'on appelle « anticoagulant lupique ».

Interprétation des résultats d'analyse

• lupus médicinal;
• hépatite C;
• borréliose;
• infection par le VIH.

Anticorps contre la cardiolipine IgM

Les anticorps anti-cardiolipine IgM (aCL IgM), lorsqu'ils sont détectés, indiquent risque élevé développement du LED ; Les aCL IgM sont détectées chez 20 à 50 % des patients atteints de lupus érythémateux disséminé et 3 à 20 % des patients atteints d'autres maladies rhumatismales systémiques.

Interprétation

Positif (anticorps détectés) :

• hépatite C;
• borréliose;
• infection par le VIH ;
• maladies systémiques du tissu conjonctif.

Normes

Maladies rhumatismales systémiques
Facteur antinucléaire (ANF) et type de lueur

La détermination du facteur antinucléaire (ANF) est la principale méthode de détection des anticorps antinucléaires, qui vous permet de détecter la plupart des variétés d'anticorps antinucléaires, y compris les auto-anticorps dirigés contre les acides nucléiques (dsDNA, ssDNA, ARN), les antigènes conformationnels et insolubles. Le résultat du dosage de l'ANF est la présence d'auto-anticorps dans le titre diagnostique, le titre final de dilution du sérum, reflétant l'affinité et la concentration des auto-anticorps, ainsi que le type de luminescence du noyau cellulaire (essai 01.02.15.005). Les caractéristiques d'une technique spécifique dépendent principalement du choix du substrat, qui peut varier des cryosections (foie ou rein de rat) aux lignées cellulaires proliférantes en culture (Hep2, Kb, HeLa), ainsi que de la méthode de fixation tissulaire, qui peut affecter la préservation d'un certain nombre d'antigènes nucléaires ANA.

L'historique du développement des tests de détection des anticorps antinucléaires :

Début du XXe siècle - "corps hyalins" dans le cytoplasme des leucocytes

1948 Hargraves, Richmond, Morton - une méthode pour la détection des cellules LE in vitro pendant l'incubation à long terme d'une suspension leuco de patients atteints de LED

1951 Lee, Michael, Vural - découvrent un facteur sérique qui stimule la phagocytose des noyaux lymphocytaires par les leucocytes du sang périphérique

1957 Holoborow, Weir, Johnson ont utilisé la méthode d'immunofluorescence indirecte développée par Coons en 1950 pour détecter l'ANF sur des cryosections de foie humain

1961 Beck - tissu utilisé d'animaux de laboratoire

1982 Tan - utilisant la lignée cellulaire humaine continue HEp-2, ce test est devenu l'étalon-or pour la détection des ANA

1958 Jones - découvre dans le sang de patients atteints du syndrome de Sjögren un facteur capable de précipiter des extraits de noyaux cellulaires, qui a servi d'impulsion pour décrire la plupart des types d'anticorps antinucléaires

Immunofluorescence indirecte sur une lignée cellulaire continue Hep2

La méthode de détection de l'ANF a été développée par Tan (Tan, 1982) en utilisant la lignée cellulaire épithélioïde humaine transplantable HEp-2 (ATCC réf. n° CCL-23) comme substrat. Cette lignée cellulaire, dérivée d'un adénocarcinome laryngé humain, est une grande cellule épithéliale malpighienne polyploïde non kératinisée qui forme une monocouche sur du plastique et du verre.

Figure : Lignée cellulaire HEp-2 colorée avec une coloration hématologique.

La relative simplicité de cette lignée, les gros noyaux et la présence de tous les antigènes humains ont fait de la méthode d'immunofluorescence indirecte utilisant la lignée cellulaire HEp-2 continue la principale méthode de détection de l'ANF. Dans la littérature anglaise, il n'y a pas de nom unique pour cette méthode, parfois cette méthode est appelée par brièveté FANA (Fluorescent AntiNuclear Antibody detection). Le manque d'unité de nomenclature a créé une confusion au nom des tests de laboratoire. Parfois, sous le terme "anticorps antinucléaires", les laboratoires immunologiques désignent des tests, basés à la fois sur les méthodes de dosage immunoenzymatique et d'analyse immunochimique, et sur la méthode d'immunofluorescence. Dans la littérature de langue russe, nous considérons qu'il est nécessaire de conserver le nom national de cet indicateur - "facteur antinucléaire" (ANF) afin de distinguer la méthode immunofluorescente des autres tests de détection des ANA.

Il est nécessaire de détecter l'ANF de la classe IgG, car la détection de l'ANF représentée par d'autres classes d'immunoglobulines n'a pas de valeur diagnostique indépendante. Des dilutions standard du sérum du patient sont incubées avec un substrat tissulaire, ce qui permet aux anticorps antinucléaires du sérum du patient de se lier aux cibles nucléaires appropriées. Les sites de liaison des auto-anticorps sont ensuite détectés à l'aide d'un antisérum anti-humain marqué à la fluorescéine.

Bien que d'autres lignées cellulaires humaines puissent être utilisées comme substrats, cependant, en raison de leur bonne morphologie et de leur facilité de culture, ce sont les lignées Hep-2 qui sont devenues un substrat généralement accepté pour l'immunofluorescence indirecte. Son utilisation améliore la sensibilité du test en raison de la fluorescence lumineuse même avec des dilutions importantes du sérum du patient, et un grand noyau riche en euchromatine vous permet de décrire avec précision le type de luminescence. De plus, l'utilisation de la lignée cellulaire Hep-2 contribue à la détection des anticorps Ro/SS-A, ainsi que des anticorps contre les antigènes nucléolaires, qui sont pauvres lors de l'utilisation de cryosections de tissus d'animaux de laboratoire. D'autres avantages de HEp-2 incluent une fréquence élevée de division cellulaire, qui permet de détecter des anticorps dirigés contre des antigènes exprimés uniquement lors de la division cellulaire, et l'absence de matrice cellulaire tissulaire, ce qui rend difficile la visualisation d'une luminescence spécifique par rapport à l'histologie. sections.

Titres de facteur antinucléaire

Le titre ANF est défini comme la dernière dilution du sérum du patient qui présente une nette fluorescence des noyaux cellulaires. Lors de l'utilisation de tissus d'animaux de laboratoire, le titre diagnostique d'ANF est de 1:8-1:10, tandis que lors de l'utilisation de la lignée cellulaire HEp-2, il est recommandé d'utiliser le titre initial de 1:80. Dans ce cas, les titres ANF sont normalement inférieurs à 1:160.

Lors de l'utilisation de titres inférieurs à 1:160, la fréquence est faible résultats positifs chez les individus cliniquement sains ne dépassera pas 5% et, en même temps, ne permettra pas de manquer des titres significatifs d'ANA chez les patients atteints de maladies diffuses du tissu conjonctif.

Pour déterminer le titre final, le titrage est généralement utilisé en étapes x2 (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120, etc. Un titrage grossier peut également être utilisé. Dans le contexte d'exacerbation des maladies rhumatismales Des titres ANF de plus de 1:640 sont généralement notés, et en rémission, les titres diminuent à 1:160-1:320.

Il existe des recommandations pour noter les résultats de la détection d'ANF, en indiquant le contenu "en croix". Cela permet aux laboratoires d'économiser des réactifs et de réduire les coûts de main-d'œuvre pour la recherche. Dans ce cas, la détermination du titre final n'est pas possible. Il faut tenir compte du fait que le titre final a plus importance, par rapport au nombre d'auto-anticorps liés au substrat, puisqu'il est directement lié à l'affinité de leur interaction avec l'antigène. Il est souhaitable de déterminer le titre final chez tous les patients positifs, ce qui permet de clarifier la présence dans le sérum d'auto-anticorps de haute affinité, plus étroitement liés à l'activité du processus.

Type de luminescence du noyau du facteur antinucléaire

Déjà dans la première expérience une application clinique Immunofluorescence indirecte pour la détection de l'ANF à l'aide de cryosections de tissus de laboratoire, il a été noté que le sérum de patients atteints de maladies auto-immunes "colorait" les noyaux cellulaires de différentes manières, ce qui entraînait une luminescence sélective de certaines structures nucléaires. La clarification de ce phénomène a conduit à la description des soi-disant "types de luminescence" du noyau dans le test d'immunofluorescence. Cela est dû au fait que chaque type d'ANA a des cibles cellulaires spécifiques, de sorte que le type de luminescence du noyau, du nucléole et du cytoplasme de la cellule reflète l'interaction de l'ANA dans le sérum du patient avec des structures contenant des antigènes à l'intérieur. la cellule. Le type de luminescence dépend de la présence d'auto-anticorps spécifiques dans le sérum sanguin du patient, sur la base desquels une conclusion préliminaire peut être tirée concernant les types d'AHA présents dans ce sérum. Cependant, l'utilisation de coupes histologiques de tissus d'animaux de laboratoire ne permet pas de déterminer de manière fiable le type de luminescence. Parallèlement, l'utilisation de lignées cellulaires transplantables telles que Hep-2 permet de décrire un nombre important d'options de coloration nucléaire et cytoplasmique. Il existe trois principaux groupes d'antigènes, dont la présence d'anticorps détermine différents types de luminescence :

Le type de luminescence du noyau cellulaire augmente considérablement le contenu informatif de la détection de l'ANF et, par conséquent, il doit être systématiquement déterminé lors de la détermination de cet indicateur. L'utilisation de cellules HEp-2 permet de caractériser plus de 20 variantes différentes de coloration nucléaire, qui dépendent du spectre d'ANA présent dans le sérum à tester. Cependant, pour un laboratoire pratique, il suffit de distinguer 6 variantes principales de liaison des auto-anticorps aux structures cellulaires contenant des antigènes.

Attribuer des types de luminescence homogène, périphérique, granulaire (petit / grand), nucléolaire, centromérique et cytoplasmique du noyau. Chaque type de lueur a très les caractéristiques, qui permettent de distinguer un variant d'un autre, ainsi qu'un ensemble d'antigènes avec lesquels les auto-anticorps réagissent dans le sérum des patients. La description des types de luminescence est une information clinique précieuse en soi, de plus, le type de luminescence peut indiquer la nécessité de certains tests de laboratoire à l'avenir.

À type homogène lueur les auto-anticorps réagissent avec les antigènes distribués de manière diffuse dans le noyau, c'est-à-dire font partie de la chromatine. De manière caractéristique, lorsqu'un type homogène de luminescence est détecté, les chromosomes condensés sont vivement colorés dans les cellules en division. Principale unités structurelles la chromatine sont des nucléosomes - des complexes d'ADN et d'histones. Ainsi, le type homogène de luminescence suggère la présence d'anticorps contre les nucléosomes, l'ADN double brin et les anticorps contre les histones. Il survient chez les patients atteints de LED et de lupus d'origine médicamenteuse, ainsi que chez les patients atteints de sclérodermie. Habituellement, la détection d'un titre élevé d'ANF avec un type de luminescence homogène indique le diagnostic de LES.

type périphérique la luminescence est souvent isolée séparément, bien qu'il s'agisse d'une sorte de type homogène de luminescence. Sa détection est un artefact de fixation cellulaire, qui conduit à la redistribution de la chromatine du noyau vers la périphérie. Il est important de distinguer le type de luminescence périphérique de la coloration de la membrane nucléaire, qui est notée dans les maladies hépatiques auto-immunes. Le type périphérique de luminescence se trouve chez les patients avec des anticorps à l'ADN double brin et est principalement détecté chez les patients atteints de LED.

Type granulaire est la plus fréquente et, en même temps, la moins spécifique. Parfois, ce type de lueur dans la littérature domestique est appelé "tacheté" ou "réticulé". Le nom "granulaire" reflète plus précisément ce phénomène, puisque dans ce cas, les auto-anticorps réagissent avec des granules dans le noyau, représentant des complexes nucléoprotéiques supramoléculaires. Ces complexes de protéines et d'acides nucléiques remplissent un certain nombre de fonctions dans le noyau nécessaires pour fonctionnement normal cellules. De tels complexes comprennent notamment les splicéosomes, qui effectuent le réarrangement post-transcriptionnel de l'ARNm nécessaire à la synthèse des protéines sur les ribosomes. La composition contient de nombreuses nucléoprotéines différentes, ce qui provoque une variété de cibles antigéniques lorsqu'un type granulaire de luminescence est détecté. Les principaux auto-antigènes, dont les anticorps conduisent à la visualisation du type granulaire de luminescence, comprennent les antigènes Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B et PCNA. Les cellules en cours de division perdent la plupart des complexes nucléoprotéiques formés, par conséquent, les figures mitotiques dans la lignée cellulaire avec un type de luminescence granulaire ne sont pas colorées. Le type granulaire de luminescence nucléaire est noté chez les patients atteints de SLE, SS, SS, DM/PM, RA et un certain nombre d'autres maladies auto-immunes. De faibles titres d'ANF de type granulaire prédominent dans les sérums sanguins d'individus cliniquement sains atteints d'ANF sans signes de maladie systémique.

Détection de titres très élevés d'ANF (1:2560-1:10000) avec type granulaire grossier la luminescence du noyau indique généralement un diagnostic de maladie mixte du tissu conjonctif et nécessite un examen supplémentaire pour détecter l'antigène RNP, qui est le principal marqueur sérologique de cette maladie.

Les antigènes nucléolaires peuvent agir comme cibles ANA, conduisant à la détection type nucléolaire fluorescence. L'identification du type nucléolaire de luminescence est caractéristique de la sclérodermie et de ses variétés. type nucléolaire fluorescence est déterminée chez les patients présentant des anticorps dirigés contre les composants du nucléole, tels que l'ARN polymérase 1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl.

type centromère la fluorescence est notée lorsque des anticorps dirigés contre les centromères des chromosomes apparaissent et ne se trouve que dans les cellules en division. Sa présence est caractéristique de la variante CREST de la sclérodermie.

Type cytoplasmique la lueur indique des anticorps dirigés contre les ARNt synthétases, en particulier Jo-1, qui sont notés dans la polymyosite. De plus, il est détecté chez des patients présentant des ANA dirigés contre d'autres composants du cytoplasme cellulaire : anticorps contre l'actine dans les hépatites auto-immunes, anticorps contre les mitochondries dans la cirrhose biliaire primitive.

Il est possible de caractériser un certain nombre d'autres variétés de luminescence, et ces types de coloration du noyau cellulaire peuvent être caractéristiques d'une variété particulière d'ANA. Ainsi, les anticorps dirigés contre Scl-70 dans le test d'immunofluorescence sur les cellules HEp-20 donnent une coloration fine du noyau et des nucléoles, anti-p80 - points lumineux dans le noyau, qui sont absents des cellules mitotiques. Cependant, il faut souligner la rareté et la diversité de tels phénomènes, ce qui rend inutile leur identification dans des études de routine.

Souvent, il peut y avoir une combinaison de plusieurs types de luminescence, par exemple finement granulaire et nucléolaire, ce qui est typique des anticorps dirigés contre Scl-70. De plus, souvent à de faibles dilutions, un type de fluorescence prédomine, par exemple, granulaire, et à d'autres dilutions, des types de fluorescence homogènes ou centromériques sont détectés, ce qui indique la présence dans le sérum du patient diverses sortes ANA. Bien que le type de luminescence donne au médecin certaines données en faveur d'un diagnostic particulier, il faut tenir compte de sa spécificité relativement faible et de la variété des phénomènes rencontrés, qui nécessite un examen approfondi en laboratoire.

La détection des ANA est à la base de l'utilisation d'autres tests de laboratoire qui affinent le spectre des ANA dans le sang des patients. Compte tenu du contenu extrêmement informatif de ce test, d'autres tests et analyses des résultats de l'examen ultérieur doivent être interprétés en fonction des résultats de l'évaluation du type de luminescence et du titre ANF.

Bien que l'absence de titres significatifs d'ANA exclut presque toujours le diagnostic de maladie rhumatismale systémique active, lors de l'utilisation de la lignée cellulaire HEp-2, chez 2 à 4 % des patients qui répondent aux critères de diagnostic du LES, l'ANA n'est pas détecté ou le les titres sont faibles. Ces patients sont parfois appelés " SLE ANF-négatif", pour clarifier le diagnostic chez ces patients, un examen plus approfondi est nécessaire, principalement la détection d'anticorps dirigés contre les antigènes SS-A. Ces antigènes sont hautement solubles et peuvent être perdus à partir des noyaux cellulaires. Pour réduire cette catégorie de patients, des tests complexes sont utilisés, y compris la détermination des anticorps contre les antigènes nucléaires extractibles, les soi-disant " dépistage des maladies du tissu conjonctif», essai 000723. Un résultat négatif d'un tel examen permet avec une très forte probabilité d'exclure le diagnostic de LED et d'autres maladies rhumatismales systémiques.

L'interprétation des résultats des tests contient des informations pour le médecin traitant et ne constitue pas un diagnostic. Les informations contenues dans cette section ne doivent pas être utilisées pour l'auto-diagnostic ou l'auto-traitement. Diagnostic précis met le médecin, en utilisant à la fois les résultats de cet examen et information nécessaire d'autres sources : anamnèse, résultats d'autres examens, etc.

Unités de mesure : titre.

Interprétation des résultats

Le résultat du dosage de l'ANF est le titre, qui est la valeur de la dilution finale du sérum, qui conserve une fluorescence importante du noyau. Plus le dénominateur de la fraction est élevé, plus la dilution du sérum est importante, plus il y a d'anticorps dans le sérum du patient. Des titres de dilution sérique élevés reflètent une affinité et une concentration élevées d'auto-anticorps.

L'identification de titres élevés (1/640 et plus) indique une forte probabilité de maladie rhumatismale systémique ou de maladie hépatique auto-immune et nécessite un examen clinique, de laboratoire et instrumental minutieux. L'absence de titres élevés de facteur antinucléaire réduit considérablement la probabilité de maladies auto-immunes systémiques.

À de faibles titres (jusqu'à 1/160), le facteur antinucléaire peut être observé chez 1 à 2% des individus en bonne santé et des proches de patients atteints de maladies systémiques. La fréquence des titres positifs dans une population augmente légèrement avec l'âge. De faibles titres d'anticorps antinucléaires peuvent survenir dans de nombreuses maladies auto-immunes, infectieuses et oncologiques. L'absence de titres élevés d'anticorps antinucléaires réduit considérablement la probabilité d'un processus rhumatismal systémique et peut être utilisée pour exclure plutôt que pour confirmer le diagnostic.

Une augmentation des titres d'ANF dans la dynamique indique une exacerbation d'une maladie systémique, donc dans le LES, le titre est en corrélation avec la gravité du processus et diminue avec un traitement efficace.

En plus du titre sérique, avec un résultat positif de l'analyse, le type de luminescence du noyau est décrit. il est conditionné un large éventail des anticorps qui trouvent leurs cibles à l'intérieur de la cellule. Plus de 20 types de luminescence ont été décrits, mais 8 d'entre eux sont utilisés en pratique clinique :

Valeurs de référence:< 1:160

Parfois, 2 types de lueur peuvent être décrits, dans lesquels l'un masque l'autre dans les faibles crédits. Si un résultat ANF positif est détecté, il faut essayer d'établir les cibles antigéniques des anticorps antinucléaires à l'aide de tests de détection des anticorps à l'ADN double brin (n°126) et des anticorps aux nucléosomes (n°956), immunoblot des anticorps antinucléaires (n° 827), immunoblot d'anticorps dans la sclérodermie (n° 826), immunoblot d'anticorps dans la polymyosite (n° 939) et dosage d'anticorps contre la cardiolipine (n° 967-969, 997).

Pendant longtemps, j'ai voulu écrire sur le facteur antinucléaire, mais quelque chose m'a tout le temps arrêté. Pourquoi? Eh bien, parce qu'écrire à ce sujet, c'est essayer d'embrasser l'immensité, et la brièveté n'est clairement pas la sœur de mon talent)))

La détermination du facteur antinucléaire (ANF) est la principale méthode de détection des anticorps antinucléaires, ce qui vous permet de détecter la plupart des variétés d'anticorps antinucléaires. Le résultat du dosage de l'ANF est le fait même de la présence d'auto-anticorps, du titre final de dilution du sérum et du type de luminescence du noyau cellulaire.

L'ANF n'est pas qu'un anticorps !

La méthode de détection de l'ANF a été développée par Tan (1982) en utilisant la lignée cellulaire épithélioïde humaine transplantable HEp-2 (vous pouviez voir ce nom sur la feuille de test) comme substrat. Cette lignée cellulaire est issue d'une tumeur du larynx humain (adénocarcinome). La relative simplicité de cette lignée, les gros noyaux et la présence de tous les antigènes humains ont fait de la méthode d'immunofluorescence indirecte (nRIF) utilisant la lignée cellulaire HEp-2 transplantée la principale méthode de détection de l'ANF.

D'autres lignées cellulaires peuvent également être utilisées comme substrats (voir carrousel), cependant, en raison de sa bonne morphologie et de sa facilité de culture, c'est la lignée Hep-2 qui est devenue un substrat généralement reconnu pour l'immunofluorescence indirecte. Dans la littérature anglo-saxonne, cette méthode est parfois appelée FANA (Fluorescent AntiNuclear Antibody detection).

Parfois, sous le terme "anticorps antinucléaires", les laboratoires immunologiques désignent des tests, basés à la fois sur les méthodes de dosage immunoenzymatique et d'analyse immunochimique, et sur la méthode d'immunofluorescence.
Le facteur antinucléaire (ANF) est un anticorps détecté par immunofluorescence.
Il est nécessaire de détecter l'ANF de la classe IgG, car la détection de l'ANF représentée par d'autres classes d'immunoglobulines n'a pas de signification indépendante.

Le titre ANF est défini comme la dernière dilution du sérum du patient, qui présente une fluorescence claire (lueur) des noyaux cellulaires. Lors de l'utilisation de la lignée cellulaire HEp-2, il est recommandé d'utiliser le titre initial de 1:80 ; dans ce cas, les titres ANF sont normalement inférieurs à 1:160. Pour déterminer le titre final, le titrage est généralement utilisé en étapes x2 (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120, etc.).

Dans le contexte d'une exacerbation de la maladie, des titres ANF supérieurs à 1: 640 sont généralement notés et, pendant la rémission, les titres peuvent diminuer jusqu'à 1: 160-1: 320.

La cotation des résultats de détection (« en croix » +++) permet aux laboratoires d'économiser des réactifs et de réduire les coûts de main d'œuvre pour la recherche. Dans ce cas, la détermination du titre final n'est pas possible❌

Il est souhaitable de déterminer le titre final chez tous les patients positifs, ce qui permet de clarifier la présence d'auto-anticorps dans le sérum, qui sont plus étroitement liés à l'activité du processus.

TYPES DE LUMINOSITÉ NUCLÉAIRE

Le type de lueur du noyau est l'une des caractéristiques clés dans la détection de l'ANF. Chaque type d'anticorps antinucléaire (ANA) a des cibles spécifiques dans la cellule et reflète l'interaction du sérum du patient avec des structures à l'intérieur de la cellule. Le type de lueur dépend de la présence d'auto-anticorps spécifiques dans le sang, sur la base desquels une conclusion préliminaire peut être tirée concernant les types d'anticorps présents dans ce sérum. Le type de luminescence du noyau cellulaire augmente considérablement le contenu informationnel de la détection de l'ANF.

L'utilisation des cellules HEp-2 permet de caractériser plus de 20 variantes différentes de coloration nucléaire, cependant, pour la pratique clinique, il suffit d'identifier les principales. Chaque type de lueur a des caractéristiques très caractéristiques qui permettent de distinguer une variante d'une autre.

À type de lueur homogène les auto-anticorps réagissent avec les antigènes distribués de manière diffuse dans le noyau, c'est-à-dire font partie de la chromatine.

A cause de quoi ? Anticorps contre les nucléosomes, l'ADN, les histones.

Lorsque? Chez les patients atteints de LED et de lupus d'origine médicamenteuse, ainsi que chez les patients atteints de sclérodermie.

Souvent, la détection d'un titre élevé d'ANF avec un type de luminescence homogène indique le diagnostic de LES.

Type de lueur périphérique peuvent être isolés séparément, même si c'est une sorte d'homogène. Le type périphérique de luminescence se trouve chez les patients présentant des anticorps contre l'ADN double brin et est détecté principalement dans le LES, les maladies du foie.

Type granuleux (moucheté, maille) est le plus courant et, en même temps, le plus non spécifique.

A cause de quoi ? Antigènes Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B et PCNA.

Lorsque? LED, maladie/syndrome de Sjögren, sclérodermie, dermatomyosite/polymyosite, PR et un certain nombre d'autres maladies. De faibles titres (1:160-1:320) d'ANF avec un type de luminescence granulaire peuvent être trouvés dans les sérums sanguins d'individus cliniquement sains SANS signes de maladie systémique.

La détection de titres très élevés d'ANF (1:2560-1:10000) avec un type de luminescence à gros grains du noyau indique généralement un diagnostic et nécessite un examen supplémentaire pour détecter l'antigène RNP.

Les antigènes nucléolaires peuvent agir comme cibles ANA, conduisant à la détection type de fluorescence nucléolaire.

A cause de quoi ? ARN polymérase 1, NOR, U3RNP, PM/Scl.

Lorsque? La sclérodermie et ses variétés.

type centromère noté avec l'apparition d'anticorps dirigés contre les centromères des chromosomes et ne se trouve que dans les cellules en division. Sa présence est caractéristique du syndrome CREST (une variante de la sclérodermie).

Type de luminescence cytoplasmique.

A cause de quoi ? Anticorps contre les ARNt synthétases, en particulier Jo-1, qui sont notés dans la polymyosite. De plus, il est détecté chez des patients atteints d'ANA dirigés contre d'autres composants du cytoplasme cellulaire: avec une hépatite auto-immune, avec une cirrhose biliaire primitive.

Un certain nombre d'autres variétés de luminosité peuvent être caractérisées. Les anticorps anti-Scl-70 donnent granuleux fin coloration du noyau et des nucléoles, anti-p80 - points lumineux dans le noyau, absents des cellules mitotiques.

Souvent, il peut y avoir une combinaison de plusieurs types de luminescence, par exemple finement granulaire et nucléolaire, ce qui est typique des anticorps dirigés contre Scl-70.

Parfois, à de faibles dilutions, un type de luminescence prédomine, par exemple granulaire, et à d'autres dilutions, des types de fluorescence homogènes ou centromériques sont détectés, ce qui indique la présence de divers types d'ANA dans le sérum du patient.

Il existe un certain nombre de maladies dans lesquelles le système de défense prend les cellules de son propre corps comme étrangères, après quoi il commence à les attaquer par erreur. La plupart des maladies auto-immunes sont forme chronique et constituent une menace sérieuse pour la santé. Afin d'identifier ces affections au stade le plus précoce de leur évolution, les médecins prescrivent une analyse de l'ANF. Cette abréviation signifie "facteur antinucléaire". Certains rapports qualifient l'étude d'ANA. Le sens signifie "analyse des anticorps antinucléaires". L'ANF est un indicateur cliniquement significatif qui aide le médecin à créer le schéma thérapeutique le plus efficace et à prévenir le développement de complications.

L'essentiel de la méthode

Le matériel biologique pour la recherche est le sang. Lors de l'entrée dans le corps de tout agent pathogène le système immunitaire commence à produire des anticorps spécifiques, dont la tâche est de détruire les antigènes étrangers. L'essence de la méthode est de détecter et quantification ces substances dans le tissu conjonctif fluide.

Les médecins disent qu'un test sanguin ANF est un test de laboratoire qui contient un haut degré d'information. Avec son aide, il est possible d'identifier toutes les pathologies auto-immunes même à un stade précoce de leur développement.

Des anticorps spécifiques sont également souvent détectés chez les personnes souffrant d'hépatite grave, de cancer et de certains maladies infectieuses. Ces substances peuvent également être trouvées chez les personnes en bonne santé. Une telle situation nécessite approche intégrée pour identifier la cause.

L'analyse ANF implique parfois une évaluation du contenu quantitatif des immunoglobulines. Leur présence peut indiquer le développement de collagénose et de maladies rhumatismales.

Les indications

Il est important de savoir qu'un test sanguin ANF est une étude qui est prescrite pour confirmer ou exclure la présence de pathologies auto-immunes, ainsi que pour évaluer l'efficacité du traitement.

Un médecin peut suspecter une maladie par les symptômes suivants :

• Un état de fièvre de longue durée sans causes évidentes.
• Douleur dans les articulations.
• Augmentation du degré de fatigue.
• Douleurs dans les muscles et les articulations.
• Manifestations cutanées sans causes évidentes.
• Épisodes fréquents de crampes musculaires.
• Température élevée corps.
• Diminution du poids corporel.
• Épisodes réguliers de nausées.
• Mal de crâne.
• Déficience auditive.
• Diarrhée.

De plus, une analyse ANF est prescrite si une maladie rhumatismale est suspectée. L'étude est réalisée après avoir reçu les résultats des diagnostics de laboratoire, dans lesquels les indicateurs d'ESR, de CEC et de protéine C-réactive sont augmentés.

Ce qui montre

L'analyse ANF du sang révèle des pathologies de nature auto-immune. L'étude est informative en ce qui concerne les maladies suivantes :

• Le lupus érythémateux disséminé.
• Encéphalomyélite aiguë disséminée.
• La maladie de Sjögren.
• La polyarthrite rhumatoïde.
• pelade.
• La maladie d'Addison.
• Spondylarthrite ankylosante.
• Syndrome des antiphospholipides.
• auto-immune l'anémie hémolytique.
• pemphigoïde bulleuse.
• hépatite auto-immune.
• la maladie coeliaque.
• Pathologies auto-immunes oreille interne.
• La maladie de Chagas.
• Syndrome de Churg-Strauss.
• Bronchopneumopathie chronique obstructive.
• Dermatomyosite.
• La maladie de Crohn.
• Diabète J'écris.
• Syndrome de Goodpasture.
• Thyroïdite de Hashimoto.
• Maladie de Graves.
• Le syndrome de Guillain Barre.
• Maladie de Kawasaki.
• Hydradénite purulente.
• néphropathie primaire.
• Purpura thrombopénique idiopathique.
• La cystite interstitielle.
• Lupus érythémateux.
• Syndrome de Sharp.
• Sclérodermie en forme d'anneau.
• Sclérose en plaque.
• Narcolepsie.
• Neuromyotonie.
• Pemphigus vulgaire.
• Psoriasis.
• Phénomène de raynaud.
• Vascularite.
• Granulomatose de Wegener.

Ceci est une liste incomplète de maladies. Il est important que l'analyse de l'ANF montre le développement de pathologies auto-immunes au stade le plus précoce de leur évolution. Cela permet au médecin de décider de la tactique de traitement et, à l'avenir, d'évaluer son efficacité.

Formation

Le prélèvement de biomatériaux est effectué le matin. Il est nécessaire de donner du sang à jeun. Le dernier repas doit être pris au moins 4 heures avant. Dans le même temps, il est permis de boire de l'eau à tout moment et en toute quantité. La consommation d'alcool est interdite.

Le repos est affiché 1 jour avant l'étude. Le stress physique et psycho-émotionnel conduit souvent à un faux résultat. Il est interdit de fumer une demi-heure avant le don de sang.

Il est nécessaire d'informer le médecin des médicaments pris au moment de la prescription de l'analyse ANF. Cela est dû au fait que les composants actifs de certains médicaments provoquent la production d'anticorps et peuvent également provoquer un lupus d'origine médicamenteuse. Faux résultats négatifs sont souvent le résultat de la prise de glucocorticoïdes.

Si le patient s'est vu prescrire une physiothérapie ou des examens instrumentaux, ils ne doivent être effectués qu'après un don de sang.

Échantillonnage de biomatériaux

Il a lieu le matin. Le matériel biologique est du sang veineux. Son échantillonnage est effectué selon l'algorithme standard. En règle générale, le sang est prélevé dans une veine située sur le coude.

Une fois le tissu conjonctif liquide obtenu, du sérum en sera isolé. C'est ce qu'il faut pour l'analyse.

Types d'études et leur description

Actuellement, il est possible de détecter des anticorps dans un biomatériau de plusieurs manières :

1. Utilisation de la microscopie par immunofluorescence indirecte. Si des substances spécifiques sont présentes dans le sang, elles commenceront à se lier à des antigènes nucléaires spécifiques. Dans les laboratoires, on utilise des éléments capables de briller dans un spectre séparé. Ensuite, le biomatériau est soigneusement étudié au microscope. La maladie peut être suspectée par le type de lueur. Cette méthode reconnu comme le plus informatif en ce qui concerne la détermination de la valeur des anticorps antinucléaires. Une variante de la technique est une étude utilisant des cellules HEp. L'analyse de l'ANF dans ce cas implique l'échantillonnage de biomatériau du larynx. Le processus n'est pas associé à l'apparition de sensations douloureuses et d'autres sensations inconfortables. Il est important de savoir que le test sanguin ANF HEp-2 est actuellement le test le plus précis. cellules épithéliales du larynx sont incubés avec du sérum, après quoi ils sont également combinés avec des substances fluorescentes.
2. Avec l'aide de Son essence réside dans le fait que lorsque la relation entre les anticorps et les antigènes se produit, la couleur de la solution change. La présence de l'une ou l'autre teinte permet de suspecter la présence d'une certaine pathologie.

Le médecin traitant doit s'occuper de l'interprétation de l'analyse ANF. Si les résultats des tests sont positifs, des tests supplémentaires sont prescrits. Le diagnostic final n'est pas fait sur la base de la conclusion d'une analyse.

Valeurs normales

meilleur résultat est celui dans lequel les anticorps antinucléaires sont absents. Cependant, il convient de rappeler qu'ils peuvent également être trouvés chez des personnes en parfaite santé. Dans ce cas, un réexamen est indiqué.

La norme d'analyse ANF est un titre ne dépassant pas 1:160. Cet indicateur est pertinent pour les adultes et les enfants.

Lors de la transcription d'un test sanguin ANF, il est important de prendre en compte les informations suivantes :

• Des titres faibles ne garantissent pas l'absence de pathologie de nature auto-immune. Selon les statistiques, 5% des patients dont les résultats de l'étude sont négatifs.
• Si une personne présente tous les symptômes d'une maladie auto-immune et que l'analyse indique le contraire, le médecin n'exclut pas la présence d'une maladie. Dans de telles situations, un dosage immunoenzymatique est en outre effectué.

Une analyse ANF effectuée à l'aide de cellules HEp-2 est considérée comme normale si le titre n'est pas supérieur à 1:160. Un résultat supérieur à 1:640 indique une exacerbation des pathologies rhumatismales. Pendant la période de rémission de la maladie, le titre diminue à 1:320. Dans ce cas, seul un médecin sera en mesure d'identifier le fait, comme l'indique un tel taux bas, basé sur l'histoire et les caractéristiques individuelles de la santé du patient.

ANF ​​élevé

En se liant aux antigènes, ils forment un complexe immun. Ce dernier, à son tour, est le facteur de départ pour le développement processus inflammatoire dans les parois des vaisseaux sanguins. En conséquence, les premiers symptômes alarmants de maladies systémiques apparaissent chez une personne. L'analyse montre des titres élevés.

Dans ce cas, la pathologie peut être identifiée en déterminant le type de lueur. Interprétation des résultats:

• Homogène. Une telle lueur peut indiquer la présence d'un lupus érythémateux disséminé, d'une hépatite chronique et d'une sclérodermie.
• Périphérique. Toujours parler de développement
• Granulaire. Maladies possibles: syndrome de Sjögren, lupus érythémateux disséminé, polyarthrite rhumatoïde, pathologie mixte du tissu conjonctif.
• Nucléolaire. Ce type de lueur est caractéristique du lupus érythémateux disséminé, de la polymyosite, du syndrome de Sjögren et de la sclérodermie.
• Centromérique. Pathologies possibles: calcification cutanée, dysfonction oesophagienne, syndrome de Raynaud, télangiectasies, sclérodactylie.
• Cytoplasmique. Une telle lueur indique des maladies hépatiques auto-immunes ou une polymyosite.

ANF ​​déclassé

Une diminution du taux d'anticorps antinucléaires n'a d'importance clinique que dans la prédiction et la surveillance des maladies systémiques existantes et précédemment identifiées.

L'indicateur ANF dépend directement de l'intensité processus pathologique. À cet égard, sa diminution est un signe favorable, indiquant que le traitement a réussi et que la maladie est entrée en rémission.

Traitement

Chaque pathologie de nature auto-immune nécessite une approche thérapeutique spécifique. Le but d'effectuer un test sanguin pour l'ANF est d'identifier les anticorps dans le tissu conjonctif liquide et d'évaluer la nature de leur interaction avec des antigènes spécifiques. Sur la base des résultats du diagnostic, le médecin peut établir un diagnostic préliminaire. Des recherches supplémentaires sont nécessaires pour le confirmer. Et seulement après cela, le médecin établit un plan de traitement. Choix médicaments dépend directement de la pathologie détectée chez une personne.

Prix

Vous pouvez passer un test ANF dans un laboratoire indépendant, une clinique privée ou un établissement médical public. Il est important de savoir que toutes les cliniques budgétaires ne proposent pas un tel service. En ce qui concerne sa disponibilité, vous devez vérifier auprès du registre.

L'étude est payée même en l'état établissements médicaux. Le coût de l'analyse dépend directement de la politique de tarification de la clinique, qui comprend de nombreux facteurs. Prix ​​minimum est de 1000 roubles, le maximum ne dépasse pas 1700 roubles. De plus, vous devez payer un supplément pour le prélèvement sanguin. Le coût de ce service, en règle générale, ne dépasse pas 200 roubles.

Pour terminer

L'abréviation ANF signifie facteur antinucléaire. Normalement, il ne devrait pas être présent dans le sang personne en bonne santé ou sa concentration doit être inférieure à 1:160. Une analyse de l'ANF est prescrite afin d'identifier les pathologies de nature auto-immune chez un patient au stade le plus précoce de son évolution.

L'essence de la méthode: lorsque des agents provoquants pénètrent dans le corps, des anticorps commencent à être produits par le système de défense. Leur travail consiste à attaquer les antigènes et à les détruire. Pour détecter cette réaction, le patient prélève sang veineux suivi de la séparation du sérum. Des antigènes spécifiques sont ajoutés à ce dernier et d'autres réactions sont évaluées.