Syphilis- une maladie vénérienne chronique, caractérisée par un changement successif des périodes individuelles de la maladie. C'était l'agent causal de la syphilis. découvert en 1905 par le scientifique allemand Shaudin.

Morphologie et propriétés biologiques. Treponema pallidum est un fin fil frisé de 15x0,25-0,5 µm, ayant 8-14 spires uniformes de la spirale situées à proximité les unes des autres. Il est difficile à colorer avec des colorants à l'aniline et a donc reçu le nom de spirochète pâle. Pour la coloration, la méthode Romanovsky-Giemsa est utilisée (les spirochètes sont peints en rose pâle), coloration négative avec une solution d'encre (les spirochètes restent non colorés et sont visibles sur un fond sombre). Pour détecter les spirochètes dans les tissus infectés, on utilise la méthode d'imprégnation à l'argent (méthode Levaditi), dans laquelle des tréponèmes colorés en noir sont visibles sur le fond des cellules tissulaires jaunes. Dans l'étude du matériau dans le champ de vision sombre, le spirochète pâle diffère des spirochètes saprophytes trouvés sur les muqueuses de la cavité buccale et des organes génitaux, des boucles uniformes, des mouvements ondulatoires lisses.

Il est plus fin que les autres tréponèmes, est capable de se plier à un angle et d'effectuer des mouvements de pendule caractéristiques. L'agent causal de la syphilis est difficilement cultivé, dans des conditions anaérobies. Pour la culture, des milieux contenant du sérum de lapin ou de cheval (milieux Ulengut et Tersky) sont utilisés. Dans le même temps, les souches de cultures (obtenues sur milieux nutritifs) de spirochètes perdent leur virulence et modifient leur structure antigénique. Les tréponèmes contiennent des endotoxines et ont une structure antigénique complexe.

Durabilité. Le spirochète pâle à l'extérieur des tissus du patient meurt rapidement, est instable lorsqu'il est séché, l'action des désinfectants conventionnels et haute température; même à 40°C, il meurt au bout de 2 heures.Il est plus résistant aux basses températures : il supporte le gel jusqu'à un an.

Pathogénicité.À vivo Les animaux ne contractent pas la syphilis. Réussit expérimentalement à infecter des singes, des lapins, des hamsters.

Pathogenèse et clinique. Les portes d'entrée de l'infection sont les muqueuses et la peau, qui présentent les lésions les plus mineures. La période d'incubation dure en moyenne 3 à 4 semaines, après quoi commence la période primaire de la syphilis: au site d'introduction de l'agent pathogène, une légère érosion apparaît, surélevée au-dessus de la peau, avec des bords lisses, un fond lisse et brillant , rose ou rouge, souvent indolore, avec un infiltrat dense à la base , à cause duquel elle a reçu le nom de "chancre dur". Se sentir pas bien, mal de tête. Les ganglions lymphatiques augmentent, deviennent denses sans signes visibles d'inflammation. Ils ne sont généralement pas soudés aux tissus environnants. Après 20 à 30 jours, le chancre dur guérit.

Spirochètes de ganglions lymphatiques pénètrent dans le sang, se multiplient et pénètrent dans les organes et les tissus et peuvent les endommager. 6 à 7 semaines après le début de la maladie, une période secondaire de syphilis se développe, caractérisée par une généralisation du processus et l'apparition d'éruptions cutanées abondantes et variées sur la peau et les muqueuses (syphilides) de tons roses ou rouges. peut se présenter sous forme de roséole, papules, vésicules, pustules. Si le traitement n'est pas effectué, après 2-3 ans, la troisième période de syphilis commence - gommeuse. Il existe une syphilis tuberculeuse, ou syphilis nodulaire profonde (gomme sous-cutanée). Des tubercules sphériques denses apparaissent sur la peau et les muqueuses. Ils peuvent exister indéfiniment, puis se résoudre ou s'ulcérer, suivis de cicatrices. Avec la formation de gomme syphilitique, un nœud apparaît dans le tissu adipeux sous-cutané, qui augmente, se soude avec le tissu environnant et avec la peau. Au-dessus de la partie centrale de la gomme, la peau s'amincit et s'ouvre. La gomme se transforme en ulcère gommeux avec mauvaise odeur: son fond est couvert de pourriture nécrotique. En quelques mois, l'ulcère guérit et une cicatrice étoilée rétractée reste à sa place. Dans la dernière, quatrième période, parasyphilitique, qui peut survenir 10 à 20 ans après le début de la maladie, des lésions spécifiques de la partie centrale système nerveux sous forme de paralysie progressive ou de tabès dorsal.

Immunité. Il n'y a pas d'immunité naturelle, innée : l'infection conduit toujours au développement de la maladie. La question de l'état de l'immunité acquise n'est pas entièrement comprise. Au cours de la maladie, une immunité non stérile se développe, qui a le caractère d'un tissu cellulaire. On l'appelle anti-chancre, car lorsqu'il est réinfecté au cours de la maladie, un nouveau chancre n'apparaît pas et les spirochètes se propagent dans tout le corps, participant au développement de lésions syphilitiques ultérieures.

Diagnostic microbiologique. Méthodes de base diagnostic de laboratoire- microscopique et sérologique. Dans la première période, la microscopie du contenu séreux du chancre dur est réalisée dans un champ sombre ou dans des frottis colorés selon Romanovsky-Giemsa. La décharge des lésions cutanées des périodes secondaire et tertiaire est également soumise à un examen microscopique. À partir de la 5-6ème semaine à partir du moment de l'infection ou à la 2-3ème semaine après l'apparition d'un chancre dur, des méthodes de diagnostic sérologique sont utilisées. Appliquer la RSK (réaction de Wassermann) et les réactions sédimentaires (réactions de précipitation) de Kahn et Sachs-Vitebsky. La réaction de Wassermann est réalisée avec le sérum du patient à l'aide d'antigènes non spécifiques (un extrait alcoolique de lipoïdes de cœur de bovin additionné de cholestérol, ou un antigène de cardiolipine), puisqu'il s'est avéré que les globulines sériques d'un patient atteint de syphilis sont capables à combiner avec des extraits lipoïdes obtenus à partir de divers organes. Outre les non-pédiques, un antigène spécifique obtenu à partir du tissu d'un testicule de lapin infecté par un tréponème pâle est utilisé. En l'absence d'hémolyse, la réaction est considérée comme positive, car il est évident que le complément s'est lié au système antigène-anticorps spécifique. Les réactions sédimentaires sont d'une technique simple. Leur essence réside dans le fait que lorsqu'un antigène lipidique concentré est ajouté au sérum du patient, une turbidité apparaît, puis un précipité. Étant donné que les antigènes de ces réactions ne sont pas spécifiques, ils peuvent également être positifs dans d'autres cas. maladies infectieuses(tuberculose, paludisme, etc.).

le plus spécifique dans diagnostic sérologique la syphilis est une réaction d'immobilisation du tréponème (RIT). Cette réaction est basée sur le fait que lorsque le sérum d'un patient atteint de syphilis est ajouté à une culture tissulaire de tréponèmes (cultivés dans l'ovaire de lapin), ceux-ci perdent leur mobilité en présence de complément. Parallèlement à cette réaction, un Rif indirect est également utilisé. Les composants principaux pour la stadification de cette réaction sont : le sérum du patient (dilué au 1:200), la souche tissulaire de spirochète pâle, le sérum fluorescent anti-espèce contre les globulines humaines.

La seule source d'infection est une personne pendant toutes les périodes de maladie. La voie de transmission est le contact direct avec le patient (le plus souvent lors des rapports sexuels), moins souvent par le biais d'articles ménagers. La transmission de l'infection au nouveau-né par le placenta d'une mère malade est possible.

Prévention et traitement. En URSS, les médecins ont été chargés d'éradiquer la syphilis. Pour cela, toutes les conditions préalables sont remplies : la croissance continue du bien-être et du niveau de vie culturel des travailleurs, ainsi que des mesures de contrôle telles que la participation à l'examen et au traitement des personnes à l'origine de l'infection et de celles qui ont été en contact avec eux, examens préventifs de masse, méthodes de travail en dispensaire. Un rôle important dans la prévention est joué par l'identification précoce des sources d'infection, traitement en temps opportun, l'élimination de la promiscuité. Prophylaxie spécifique pas réalisé.

Pour le traitement, le novarsenol, des préparations de bismuth, de mercure, de pénicilline sont utilisés.

Caractéristiques générales des spirochètes.

Spirochétoses - Il s'agit d'un groupe de maladies infectieuses causées par des bactéries spirales, caractérisées par une intoxication générale et un développement cyclique des espèces.

Taxonomie :

Ordre : Spirochaetales (du grec speira - boucle, chaite - cheveux)

Famille : Spirochaetaceae, Leptospiraceae

Genre : Spirochaeta Leptospira

Morphologie: micro-organismes longs, minces, incurvés en spirale, tailles 0,1-0,3x5-250 microns. La structure centrale est le cylindre protoplasmique, qui contient le cytoplasme, le nucléoïde, les ribosomes 70 S et les enzymes, entourés d'une membrane cytoplasmique et d'une paroi cellulaire. Le cylindre protoplasmique a une forme hélicoïdale permanente due au peptidoglycane, formant des verticilles primaires. Leur nombre, leur type, leur pas, leur angle d'inclinaison varient avec différents types. Boucles secondaires résultant de la courbure de tout le corps. Un flagelle périplasmique (flagelle) est situé autour du cylindre cytoplasmique en spirale, une extrémité de celui-ci est attachée à l'un des pôles du cylindre protoplasmique, et l'autre à ce dernier approximativement au milieu de la cellule, le nombre de flagelles est de 2-100 (une moitié est attachée à un pôle et l'autre à l'autre pôle). Les flagelles périplasmiques s'enroulent en spirale autour du cylindre protoplasmique, formant un fil axial, au-dessus duquel se trouve une membrane externe multicouche (l'enveloppe externe du spirochète); le flagelle est situé entre celui-ci et le cylindre (flagelle périplasmique ou endoflagelle).

Différences avec les enzoflagelles :

s'enroulent constamment autour du corps cellulaire;

complètement situé à l'intérieur de la cellule ;

se réduisent par rotation autour de son axe, en translation et en flexion ;

conserver leur mobilité dans un milieu à viscosité relativement élevée.

Les spores et les capsules ne se forment pas. Dans des conditions défavorables, ils forment des kystes en se repliant en boule.

Propriétés tinctoriales : mal coloré avec des colorants anime, à l'exception de Borrelia, gram-négatif, utilisez la méthode d'argenture Morozov.

Biens culturels : exigeant en milieux nutritifs, il est nécessaire d'ajouter des protéines natives, des glucides, des acides gras. Selon le mode de stockage de l'énergie, on distingue les anaérobies, les anaérobies facultatifs, les microaérophiles et les aérobies. La température optimale pour Leptospira et Borrelia est de 28-30 ?C.

Propriétés biochimiques : catalase-, urease-, oxydase-négatif, réaction de Voiges-Proskauer "-", ne réduisent pas les nitrates.

La résistance: dépend du genre et de l'espèce.

Rôle en pathologie .

Tréponème sont les agents responsables de la syphilis, du pian, de la pinte, du béjel ;

Borrélia– fièvre récurrente épidémique et endémique à tiques, borréliose de Lyme ;

Leptospire- la leptospirose.

Signes généraux de la spirochétose :

flux cyclique ;

détection de l'agent pathogène dans le sang et les tissus;

les principales méthodes de diagnostic microbiologique: bactérioscopique et sérologique.

2. Microbiologie de la syphilis.

Syphilis - une maladie vénérienne infectieuse chronique, caractérisée par une évolution ondulante, alternant des périodes d'activité de la manifestation clinique de la maladie avec de longues périodes de latence.

Histoire de la découverte.

L'agent causal de la syphilis a été identifié en 1905 par Shaudin et Hoffman et nommé spirochète pallidum. Wasserman, avec Keisser et Brook, a proposé un test sérologique pour le diagnostic de la syphilis.

Taxonomie.

Commander Spirochaetales

Famille : Spirochaetaceae

Genre : Tréponème

Espèce : Treponema pallidum

Morphologie: bactéries en forme de spirale de 6-14x0,2-0,3 microns, le nombre de boucles primaires est de 8 à 12, situées à égale distance les unes des autres; trois flagelles périplasmiques s'étendent des extrémités de la cellule. Ils ne forment pas de spores ou de capsules, mais dans le corps des animaux de laboratoire, ils peuvent synthétiser une nature mucopolysaccharidique d'une gaine en forme de capsule. Dans des conditions défavorables, ils peuvent se transformer en kystes, en corps sphériques granuleux et ressemblant à des kystes.

Propriétés tinctoriales : mal coloré avec des colorants à l'aniline, gram-négatif, selon Romanovsky-Giemsa - de couleur légèrement rose (pallidum - pâle), appliquez la méthode d'argenture selon Morozov et le contraste négatif selon Burri, l'étude la plus efficace dans l'obscurité -microscope de champ ou à contraste de phase.

biens culturels : anaérobies obligatoires, chimioorganohétérotrophes, la température optimale est de 35°C, à des températures supérieures à 40°C, ils perdent leur viabilité. Très exigeant sur les milieux nutritifs; il est nécessaire d'ajouter des reins, du tissu cérébral ou du liquide d'ascite. Les tréponèmes cultivés sur des milieux nutritifs (souches «culturelles») deviennent plus grossiers, plus courts, polymorphes, perdent leur immunogénicité et leur pathogénicité. Les tréponèmes se développent bien sans perdre leurs propriétés immunogènes et pathogènes dans les testicules de lapins, dans les embryons de poulet - souches «tissulaires», qui sont utilisées pour isoler et étudier l'agent pathogène chez les patients.

Propriétés biochimiques : inactif, décompose le glucose, le galactose, le saccharose, le maltose, le mannitol avec formation d'acide; former de l'indole et du sulfure d'hydrogène, liquéfier la gélatine; réduire le nitrate d'argent en argent métallique, ce qui donne aux tissus une couleur noire ou brun foncé.

Structure antigénique : protéines complexes de la membrane externe (thermolabiles, s'effondrant à 76-80 ° C, polysaccharides (thermostables); lipoprotéines, qui sont des antigènes à réaction croisée communs à l'homme et au bétail, par exemple, l'antigène cardiolipine est un extrait de lipoprotéines du cœur d'un taureau, est utilisé dans les réactions sérologiques dans le diagnostic.

facteurs de pathogénicité :

a) toxines :

Endotoxine (LPS de la paroi cellulaire);

b) les enzymes de pathogénicité n'ont pas été détectées ;

c) composants structuraux et chimiques de la cellule :

motilité due aux flagelles;

adhésifs;

protéines de la membrane externe.

La résistance: sensibles aux facteurs environnementaux, aux rayons UV, au dessèchement, aux températures élevées (à 40°C pendant 1 heure ils perdent leurs propriétés pathogènes, à 48°C ils meurent au bout de 10 minutes) ; déz. les solutions à des concentrations de travail ont un effet néfaste; résister aux basses températures (dans le froid, ils durent jusqu'à 50 jours, lorsqu'ils sont congelés jusqu'à 1 an), dans le sang total et le sérum à 4 ° C, ils restent viables pendant 24 heures; sensible aux sels de métaux lourds et aux antibiotiques (pénicilline, érythromycine, carbénicilline, etc.)

Épidémiologie.

La source de l'infection est une personne malade. Le bactérioporteur dans la syphilis ne se produit pas.

Mode de transmission :

1) contacter : a) directement ; b) indirecte.

2) transplacentaire (de la mère au nouveau-né);

3) transfusion.

Porte d'entrée : muqueuses des organes génitaux, cavité buccale etc., peau cassée.

Rôle et pathologies

Seuls les gens tombent malades avec la syphilis. Expérimentalement, vous pouvez infecter des singes, des lapins, des hamsters. Chez les singes, un chancre dur se forme, chez les lapins et les hamsters - une infection chronique généralisée.

Treponema pallidum - l'agent causal de la syphilis est inclus dans le genre Treponema (du latin trepo - tour, nemo - fil).

T. pallidum a été découvert par F. Shaudin en 1905. I. I. Mechnikov, P. Erlich, D. K. Zabolotny et d'autres ont apporté une grande contribution à l'étude de la syphilis.

Morphologie. T. pallidum est un fil en spirale mesurant 8-18 × 0,08-0,2 microns avec de petites boucles uniformes. Nombre de boucles 12-14. Les extrémités du tréponème sont pointues ou arrondies. Les tréponèmes sont mobiles. Ils ont quatre types de mouvement. Selon Romanovsky - Giemsa est peint dans une couleur rose pâle, ils s'appellent donc T. pallidum - tréponème pâle. Une mauvaise coloration est due à la faible teneur en nucléoprotéines. Les spirochètes peuvent être détectés dans les préparations colorées au Burri avec placage d'argent. De plus, ils sont étudiés à l'état vivant - dans un champ sombre.

Les agents responsables de la syphilis n'ont pas de spores ni de capsules (voir Fig. 4).

cultivation. Les tréponèmes pâles sont très exigeants en milieu nutritif. Sur des milieux nutritifs artificiels, ils ne se développent qu'en présence de morceaux de cervelle ou de reins de lapin et de liquide d'ascite. Cultivez lentement, 5-12 jours à une température de 35-36 ° C dans des conditions anaérobies. Les tréponèmes pâles se reproduisent bien dans l'embryon de poulet (par fission transversale). Lorsqu'ils sont cultivés sur des milieux nutritifs artificiels, les tréponèmes perdent leur virulence. Ces cultures sont dites culturelles. Les cultures cultivées dans des embryons de poulet sont appelées cultures tissulaires. Ils conservent généralement leur virulence.

propriétés enzymatiques tréponème n'ont pas. Cependant, les souches de culture diffèrent dans leur capacité à former de l'indole et du sulfure d'hydrogène.

formation de toxines. Pas installé.

Structure antigénique. Le tréponème pâle contient plusieurs complexes antigéniques : polysaccharidique, lipidique et protéique. Les sérogroupes et les sérovars n'ont pas été établis.

Résilience aux facteurs environnement . Les tréponèmes pâles sont instables. Une température de 45-55°C les détruit au bout de 15 minutes. Ils résistent aux basses températures. Congelées, elles se conservent jusqu'à un an. Les spirochètes sont sensibles aux sels de métaux lourds (mercure, bismuth, arsenic, etc.). Les concentrations ordinaires de désinfectants les tuent en quelques minutes. Ils sont sensibles à la benzylpénicilline, à la bicilline, etc. Sous l'influence de certains facteurs environnementaux et de médicaments antibactériens, les tréponèmes peuvent former des kystes. Sous cette forme, ils sont longtemps dans le corps à l'état latent.

Sensibilité animale. Dans des conditions naturelles, les animaux ne tombent pas malades de la syphilis. Cependant, sur des singes, comme le montrent I. I. Mechnikov et E. Roux, il est possible de reproduire image clinique syphilis : un chancre dur se forme au site d'injection. Il a maintenant été démontré que lorsque des lapins, des cobayes sont infectés, des ulcères se forment sur la peau au site d'injection ou ailleurs. Sur les lapins, par passages, vous pouvez longue durée sauf la souche isolée de tréponème.

Sources d'infection. Personne malade.

Voies de transmission. Contact domestique (contact direct), principalement contact sexuel. Parfois, la syphilis peut être transmise par des objets (vaisselle, linge de maison). D'une mère atteinte de syphilis, la maladie est transmise par le placenta à l'enfant (syphilis congénitale).

Pathogénèse. Les portes d'entrée sont les muqueuses du tractus génital et de la cavité buccale.

La période primaire - les spirochètes pénètrent dans la membrane muqueuse et après une période d'incubation (en moyenne 3 semaines), un ulcère se forme au site d'introduction, caractérisé par des bords denses et un fond - un chancre dur. La formation d'un chancre dur s'accompagne d'une augmentation des ganglions lymphatiques. La période primaire dure 6-7 semaines.

La période secondaire - les agents responsables de la syphilis se propagent dans tout le corps par les voies lymphatiques et circulatoires. Dans le même temps, de la roséole, des papules et des vésicules se forment sur la peau et les muqueuses. La durée de cette période est de 3-4 ans.

La troisième période - se développe avec la syphilis non traitée. Pendant cette période, des excroissances de granulation se forment dans les organes, les tissus, les os et les vaisseaux - gommes ou infiltrats gommeux, sujets à la décomposition. Cette période peut durer plusieurs années (sous une forme latente). Le patient pendant cette période n'est pas contagieux. Avec la syphilis non traitée (dans certains cas), après de nombreuses années, des lésions du système nerveux central peuvent survenir: avec lésions cérébrales - paralysie progressive, avec lésions moelle épinière- sécheresse dorsale. Ces maladies surviennent lorsque le tréponème est localisé dans le tissu cérébral, ce qui entraîne de graves changements organiques et fonctionnels dans le corps.

Immunité. Il n'y a pas d'immunité naturelle. Avec la syphilis, une immunité infectieuse "non stérile" se développe. C'est ce qu'on appelle un chancre, car un chancre dur ne se forme pas lors de la réinfection, mais toutes les périodes suivantes se développent. Dans la syphilis, on détecte les IgC et IgM, ainsi que les réagines IgE qui, en présence d'un antigène cardiolipidique, se lient au complément.

La prévention. Travail sanitaire et éducatif, détection précoce des patients atteints de syphilis. prophylaxie spécifique. Non développé.

Traitement. Pénicilline, bicilline, bioquinol, etc.

question test

1. Décrire la morphologie des spirochètes et les méthodes de coloration.

2. Qu'est-ce qu'un chancre dur ?

3. Quel matériel de recherche emporterez-vous à différentes périodes de la syphilis ?

4. Quelle est l'immunité contre la syphilis ?

Recherche microbiologique

Le but de l'étude: détection du tréponème pâle et sérodiagnostic.

Matériel de recherche

1. Le contenu du chancre dur (période primaire).

2. Contenu de la roséole, papules, vésicules (période secondaire).

3. Sang (secondaire, troisième et quatrième périodes).

Méthodes de recherche de base

1. Microscopique.

2. Réaction d'immunofluorescence (RIF).

3. Sérologique : 1) Réaction de Wasserman (RSK) ;

2) réactions sédimentaires.

4. Réaction d'immobilisation du tréponème (RIT).

Diagnostic sérologique

Réaction de Wasserman. La réaction est réglée selon le principe de la réaction de fixation du complément (tableau 52). Il diffère en ce qu'un antigène non spécifique peut être utilisé dans la réaction de Wasserman. Par exemple, un extrait lipoïde d'un cœur de bovin est un cardioantigène. En raison de la non-spécificité des anticorps qui réagissent avec cet antigène, ils sont appelés réagines. La réaction avec un antigène non spécifique s'explique par le fait que la teneur en globulines dans le sérum sanguin du patient augmente et que le degré de leur dispersion change. Les globulines, entrant en combinaison avec des extraits lipidiques, forment un complexe qui se lie au complément, et donc l'hémolyse ne se produit pas (dans le système hémolytique). L'absence d'hémolyse - une réaction positive - confirme sérologiquement le diagnostic de syphilis. Lors de la mise en place de réactions sérologiques, il est également nécessaire d'utiliser des antigènes spécifiques issus de tréponèmes tissulaires et culturels.

Noter. 1) ++++ délai d'hémolyse complète ; - hémolyse; 2) l'antigène non spécifique n° 1 (fraction lipoïde d'un cœur bovin) ; 3) les antigènes spécifiques n° 2 et 3 préparés à partir de cultures de tréponèmes.

Réactions sédimentaires. 1. Réaction de Kahn. Le sérum du patient est inactivé à 56°C pendant 30 minutes. 0,6% de cholestérol est ajouté à l'antigène (extrait lipidique de coeur bovin) pour augmenter la sensibilité de la réaction (tableau 53).

Comptabilisation du résultat: l'apparition de précipitations est notée comme une réaction positive.

2. La réaction de Sachs-Vitebsky (réaction sédimentaire cytocholique) est une modification de la réaction de Kahn. Les auteurs ont utilisé un antigène plus concentré, auquel on ajoute du cholestérol, ce qui contribue à une formation plus rapide du précipité.

Test d'immobilisation des tréponèmes (RIT). C'est la réaction la plus spécifique dans le diagnostic de la syphilis.

À l'heure actuelle, une méthode pour cette réaction a été développée: une suspension de tréponèmes est obtenue à partir d'un testicule écrasé d'un lapin infecté par T. pallidum et stockée dans un milieu spécial qui n'inhibe pas la mobilité des tréponèmes. 1,7 ml d'une suspension de tréponèmes tissulaires sont ajoutés au tube à essai, 0,2 ml du sérum à tester, 0,1 ml de complément frais sont ajoutés.

Témoins : dans le 1er tube à essai, à la place du sérum testé, on ajoute le sérum d'une personne saine ; dans le 2ème - du sérum inactivé est versé Cochon d'Inde. Tous les tubes à essai sont placés dans un dessiccateur ou un anaérostat, remplis d'un mélange de gaz (1 volume de dioxyde de carbone et 19 volumes d'azote) et placés dans un thermostat à 35 ° C. Ensuite, le matériau à tester est appliqué sur du verre et la mobilité des tréponèmes est étudiée en champ sombre. Le principe de la réaction est que le sérum d'un patient atteint de syphilis en présence de complément inhibe le mouvement du tréponème pâle. Déterminer le pourcentage de tréponème immobilisé.

Le résultat est considéré comme positif si les tréponèmes immobilisés sont supérieurs à 50 % ; faiblement positif - de 30 à 50%; négatif - inférieur à 20 %.

question test

1. Quel matériel est utilisé pour le diagnostic en laboratoire de la syphilis à différentes périodes de la maladie ?

2. Quelles sont les méthodes recherche en laboratoire dans le diagnostic de la syphilis ?

3. Quels antigènes doivent être utilisés dans la réaction de Wasserman ?

4. Quels sont les ingrédients nécessaires pour effectuer le test d'immobilisation des tréponèmes (RIT) ? Quelle matière est prise du sujet, qu'est-ce qui s'y détermine ?

T. pallidum sous-espèce pallidum - une bactérie en spirale de 6-14x0,2-0,3 microns de taille; les cultures peuvent être grandes tailles. Les boucles de la spirale sont les mêmes mais en hauteur, il peut y en avoir jusqu'à 14. Elles sont capables de former une forme en L.

De base comment la syphilis se propage- division transversale. L'agent causal de la syphilis instable pendant environnement externe et meurt lorsqu'il est séché, mais dans le froid, il dure jusqu'à 50 jours. Le chauffage à une température de 40 ° C pendant une heure entraîne la perte des propriétés pathogènes ; à 48 °C, les bactéries meurent en 10 min.

L'agent causal de la syphilis mal coloré avec des colorants à l'aniline (d'où le nom de "spirochète pâle"). bactérie de la syphilis réduire le nitrate d'argent en argent métallique, ce qui donne aux tissus une couleur noire ou brun foncé.

Dans la pratique domestique, la méthode d'argenture selon Morozov est courante. Selon Romanovsky-Giemsa, il devient rose et non pathogène tréponème- en violet ou bleu. La coloration négative de Burri est également utilisée.

Propriétés culturelles de la syphilis. Culture de l'agent causal de la syphilis

Spirochète pâle exigeant sur les conditions de culture, pousse mal sur les milieux artificiels; les méthodes de production stable de cultures ne sont pas encore disponibles.

Dans notre pays, le plus grand nombre souches de syphilis identifié les microbiologistes de Kazan V.M. Aristovski et P.P. Gelzer.

Ces "Kazan" souches de syphilis avec la souche Reiter, ils sont utilisés pour la fabrication d'Ag pour le sérodiagnostic. Avec une culture à long terme bactérie de la syphilis s'adapter à des environnements plus simples (par exemple, Kitta-Tarozzi) et perdre leurs propriétés pathogènes.

Colonies de syphilis petit, apparaissent le 3-5ème jour de culture.

Le contenu de l'article

Tréponème pâle

Morphologie et physiologie

T.pallidum a une forme en spirale, un cylindre protoplastique, qui est tordu en 8-12 verticilles. 3 flagelles périplasmiques s'étendent des extrémités de la cellule. Le tréponème pâle ne perçoit pas bien les colorants à l'aniline, il est donc coloré avec de la peinture Romanovsky-Giemsa. Cependant, le plus méthode efficace est son étude au microscope à fond noir ou à contraste de phase. Microaérophile. Ne pousse pas sur des milieux nutritifs artificiels. T. pallidum est cultivé dans du tissu testiculaire de lapin, où il se multiplie bien et conserve complètement ses propriétés, provoquant une orchite chez l'animal. Antigènes. La structure antigénique de T. pallidum est complexe. Il est associé aux protéines de la membrane externe, les lipoprotéines. Ces derniers sont des antigènes à réaction croisée communs aux humains et de grandes bétail. Ils sont utilisés comme antigène dans le test de Wassermann pour le sérodiagnostic de la syphilis.

Pathogénicité et pathogenèse

Les facteurs de virulence de Treponema pallidum comprennent les protéines de la membrane externe et le LPS, qui présentent leurs propriétés toxiques après avoir été libérés de la cellule. Dans le même temps, apparemment, la capacité du tréponème à former des fragments séparés lors de la division, pénétrant profondément dans les tissus, peut également être attribuée à des facteurs de virulence. Il y a trois étapes dans la pathogenèse de la syphilis. Avec la syphilis primaire, on observe la formation d'un foyer primaire - un chancre dur au site de la porte d'entrée de l'infection, suivi d'une pénétration dans les ganglions lymphatiques régionaux, où l'agent pathogène se multiplie et s'accumule. La syphilis primaire dure environ 6 semaines. La deuxième étape est caractérisée par la généralisation de l'infection, accompagnée de la pénétration et de la circulation de l'agent pathogène dans le sang, qui s'accompagne d'éruptions cutanées. La durée de la syphilis secondaire chez les patients non traités varie de 1 à 2 ans. Au troisième stade, on trouve des granulomes infectieux (gencives sujettes à la carie), localisés dans les organes internes et les tissus. Cette période chez les patients non traités dure plusieurs années et se termine par des lésions du système nerveux central (paralysie progressive) ou de la moelle épinière (tasca dorsalis).

Immunité

Avec la syphilis, il existe une réponse immunitaire humorale et cellulaire. Les anticorps résultants n'ont pas de propriétés protectrices. La réponse immunitaire cellulaire est associée à la fixation de l'agent pathogène et à la formation de granulomes. Cependant, l'élimination du tréponème du corps ne se produit pas. Dans le même temps, des conditions environnementales défavorables induisent la formation de kystes par des tréponèmes, localisés dans la paroi vaisseaux sanguins. On pense que cela indique le passage de la maladie au stade de la rémission. Avec les kystes, les tréponèmes forment des formes en L. Avec la syphilis, un HRT se forme, qui peut être détecté par un test d'allergie cutanée avec une suspension de tréponème tué. On pense que la manifestation de la période tertiaire de la syphilis est associée au THS.

Écologie et épidémiologie

La syphilis est une infection anthroponotique typique. Seules les personnes qui sont un réservoir d'infection dans la nature tombent malades. La transmission de l'infection se produit sexuellement et beaucoup moins souvent - par le biais de sous-vêtements et d'autres articles. Dans l'environnement extérieur (air), les tréponèmes meurent rapidement.

Syphilis et autres tréponématoses

La syphilis est une maladie vénérienne infectieuse chronique d'une personne, a une évolution cyclique progressive, affecte la peau, les muqueuses, les organes internes et système nerveux. L'agent causal de la maladie est Treponema pallidum.Il existe trois périodes principales dans le développement de la syphilis, dont les méthodes de diagnostic en laboratoire ont leurs propres caractéristiques. Au début de la maladie, le matériel de diagnostic en laboratoire est l'isolement d'un chancre dur, ponctué de ganglions lymphatiques, de grattages de roséole, de syphilis, etc. Dans les périodes secondaire et tertiaire, le sérum sanguin et le liquide céphalo-rachidien sont examinés.En raison du fait que l'isolement de cultures de tréponèmes purs dans les laboratoires bactériologiques conventionnels est impossible, pendant la période primaire de la maladie (rarement plus tard), une méthode de diagnostic bactérioscopique est effectué. A partir de la période secondaire, on utilise principalement des méthodes sérologiques.

Recherche bactérioscopique

Avant de prendre le matériel pathologique, essuyez d'abord l'ulcère syphilitique avec un coton-tige pour éliminer la plaque graisseuse et la microflore contaminante. Ensuite, le bas du chancre dur est irrité avec un scalpel ou une spatule en métal, ou l'ulcère est vigoureusement pressé sur les côtés avec les doigts dans un gant en caoutchouc pour exsuder l'exsudat de la plaie. Avec une petite quantité de liquide clair, il peut être ajouté à une goutte de solution de chlorure de sodium à 0,85 %. S'il est impossible de prélever du matériel au fond du chancre (phimosis, cicatrisation d'ulcère, etc.), les ganglions lymphatiques régionaux sont ponctionnés à champ sombre (mieux !), ou à l'aide d'un microscope à contraste de phase ou anoptral. dans le champ de vision sombre ressemble à une fine spirale délicate légèrement brillante avec des boucles primaires arrondies uniformes raides. Les mouvements sont fluides, il se plie donc en biais. Mais les oscillations pendulaires qui en sont particulièrement caractéristiques. L'agent causal de la syphilis doit être distingué de Treponema refringens (qui colonise les organes génitaux externes), qui est plus épais, plus rugueux, avec de grandes boucles irrégulières et a des mouvements erratiques actifs, mais ne se plie pas. Les tréponèmes de symbiose Fuzosp-irochetous se distinguent par un motif fin, des boucles douces et un mouvement erratique.Lors du diagnostic de la syphilis orale, le tréponème pâle doit être différencié des tréponèmes dentaires, en particulier de T. dentium, ainsi que de T. buccalis. Le premier d'entre eux est généralement difficile à distinguer du syphilitique. Certes, il est plus court, a 4 à 8 boucles nettes, il n'y a pas de mouvement de pendule. T. buccalis est plus épais, a des boucles initiales grossières et un mouvement erratique.En cas de doute, il faut garder à l'esprit que tous les tréponèmes saprophytes, contrairement aux pâles, se colorent bien avec les colorants à l'aniline. Ils ne pénètrent pas dans les ganglions lymphatiques, de sorte que l'étude des ponctions a une grande valeur diagnostique. La détection de tréponèmes typiques dans le ponctué des ganglions lymphatiques confirme sans conteste le diagnostic de syphilis. Ses avantages résident dans le fait que le matériel est examiné rapidement et que la morphologie des tréponèmes à l'état vivant est la plus caractéristique. Les frottis d'encre selon la méthode Burri ne sont plus utilisés.S'il n'est pas possible de mener une étude dans le champ de vision sombre, diverses méthodes de coloration peuvent être utilisées. Le tréponème pâle ne perçoit pas bien les colorants à l'aniline. Parmi les nombreuses méthodes de coloration proposées meilleurs scores obtenu en utilisant la coloration de Romanovkim-Giemsa. Les frottis réalisés sont fixés alcool méthylique ou dans un mélange de Nikiforov. Les résultats de clarté sont obtenus lorsque le colorant Romanovsky-Giemsa est versé dans la préparation. Pour ce faire, des fragments d'allumettes sont placés dans une boîte de Pétri, une lame est placée dessus avec un frottis et le colorant est versé jusqu'à ce qu'il mouille le frottis. Le temps de coloration est doublé. Au microscope, les tréponèmes pâles ont une couleur rose pâle, tandis que d'autres types de tréponèmes virent au bleu ou au bleu-violet.La méthode d'argenture de Morozov peut également être utilisée. Les tréponèmes conservent complètement leurs caractéristiques morphologiques et paraissent bruns ou presque noirs au microscope. Mais les préparations argentées ne sont pas conservées longtemps. Récemment, les méthodes de coloration des tréponèmes sont rarement utilisées.Si la syphilis est traitée avec des médicaments de chimiothérapie, il est presque impossible d'identifier l'agent pathogène dans les matériaux pathologiques, même à l'aide d'un champ de vision sombre. Dès réception d'une analyse négative, celle-ci doit être répétée.

Diagnostic sérologique de la syphilis

Lors de la réalisation de réactions sérologiques, les méthodes de recherche suivantes unifiées en Ukraine sont désormais utilisées : réaction de fixation du complément (RCC), immunofluorescence (RIF), immobilisation des tréponèmes (PIT), microréaction par précipitation (MPR) et immunodosage enzymatique (ELISA). la réaction principale et la plus courante était considérée comme la réaction de fixation du complément ou la réaction de Wasserman (РВ, RW). Pour son réglage, le sérum sanguin d'un patient atteint de syphilis et de liquide céphalo-rachidien est utilisé en cas de lésion du système nerveux.La méthode de réglage de la réaction de Wasserman ne diffère pas de la technique de conduite de RSC. La seule différence est que pour RO, non seulement un tréponème spécifique, mais un antigène cardiolipine non spécifique est utilisé.5-10 ml de sang sont prélevés de la veine cubitale à jeun ou au plus tôt 6 heures après un repas. Ne prélevez pas de sang de patients atteints de température élevée, après consommation d'alcool et d'aliments gras, chez les femmes enceintes 10 jours avant l'accouchement et les femmes en travail. Le sérum extrait du sang est chauffé à une température de 56°C pendant 30 minutes pour inactiver son propre complément. L'osmose inverse est nécessairement réglée avec deux antigènes : spécifique et non spécifique L'antigène tréponémique ultrasonore spécifique est préparé à partir de cultures de tréponème pâle (souche de Reiter) cultivées dans des tubes à essai et exposées aux ultrasons. Il est produit sous forme de poudre lyophilisée. L'antigène cardiolipine non spécifique est préparé par extraction à l'alcool des lipides d'un cœur bovin et purification à partir de mélanges de ballast, conditionnés en ampoules de 2 ml. Pour introduire l'antigène dans le RO, il est titré selon ces instructions. Immédiatement avant la mise en place du RV, le titrage du complément et du sérum hémolytique est effectué selon le même schéma que dans le RSK. La réaction de Wasserman est posée à la fois qualitativement et quantitativement. Une réaction qualitative est effectuée dans trois tubes à essai avec deux antigènes selon le schéma habituel.Les résultats de la réaction sont évalués selon un système 4 plus : une réaction positive - lorsqu'il y a un retard complet ou significatif de l'hémolyse (4 +, 3 +); réaction faiblement positive - retard partiel de l'hémolyse (2 +); réaction douteuse - un léger retard dans l'hémolyse (1 +). En cas d'hémolyse complète, le RO est considéré comme négatif.Chaque sérum ayant donné une réaction qualitative positive doit également être investigué par une méthode quantitative avec sa dilution séquentielle de 1:10 à 1:640.qui vient complet (4+) ou badge (3 +) retard d'hémolyse. La méthode quantitative de réglage du RO a importance pour évaluer l'efficacité du traitement de la syphilis. Une diminution rapide du titre de réagine indique un traitement réussi. Si le titre sérique ne diminue pas pendant une longue période, cela indique un manque d'efficacité des médicaments utilisés et la nécessité de changer de tactique de traitement.Lorsque pylori pour la syphilis primaire séronégative ou latente, tertiaire ou congénitale, il est recommandé de mettre la réaction de Wasserman à froid selon le même schéma. En cas de suspicion de neurosyphilis, l'osmose inverse est réalisée avec liquide cérébro-spinal, qui est inactivé car il ne contient pas son propre complément. Le liquide céphalo-rachidien non dilué est introduit dans la réaction et dans des dilutions de 1 : 2 et 1 : 5. La réaction de Wasserman devient positive 2 à 3 semaines après l'apparition d'un chancre dur. Dans la syphilis secondaire, il est positif dans 100% des cas, dans le tertiaire - dans 75%.De plus, dans le complexe de réactions sérologiques (CSR), une réaction de microprécipitation avec du plasma sanguin ou du sérum inactivé est utilisée comme test de dépistage.

Microréaction de précipitation

Microréaction de précipitation mise avec l'antigène cardiolipine. Le principe de la réaction est que lorsqu'une émulsion d'antigène cardiolipine est ajoutée au plasma sanguin ou au sérum d'un patient atteint de syphilis, un précipité (complexe antigène-anticorps) se forme, qui précipite sous forme de flocons. couleur blanche. Cette technique est utilisée : trois gouttes de plasma (ou de sérum inactivé) sont pipetées dans le puits de la plaque, puis une goutte de l'émulsion de l'antigène standard de cardiolipine est ajoutée. Les composants de la réaction sont mélangés en agitant la plaque pendant 5 minutes, après quoi trois gouttes d'une solution de chlorure de sodium à 0,9 % sont ajoutées et laissées à température ambiante pendant 5 minutes supplémentaires. Contrôle obligatoire avec sérum sanguin faiblement positif. Les résultats sont évalués à l'œil nu sur une source de lumière artificielle. Lorsque de gros flocons apparaissent dans le puits, la réaction est considérée comme positive (4 +, 3 +), moyenne et petite - comme faiblement positive (2 +, 1 +). À résultat négatif aucun précipité ne se forme.La microréaction de précipitation peut également être réalisée par une méthode quantitative pour établir le titre des anticorps précipitants et évaluer l'efficacité du traitement sur cette base. Des titres de MRP plus élevés sont obtenus avec le plasma qu'avec le sérum. À l'étranger, un analogue de MRP avec du sérum de patient est VDRL (laboratoire de recherche sur les maladies vénériennes) et avec du plasma - RPR (Rapid plasma reagin).

Réaction d'immunofluorescence (RIF)

Le groupe de réactions spécifiques largement utilisées pour le diagnostic sérologique de la syphilis comprend une réaction d'immunofluorescence indirecte. Comme antigène, il utilise une suspension de tréponème pâle pathogène de la souche Nichols provenant du parenchyme des testicules de lapin au 7ème jour après l'infection. La réaction est mise en deux modifications : RIF-ABS et RIF-200. Dans la première variante, un sorbant d'anticorps (sonicat) est utilisé - un antigène tréponémique ultrasonique pour le SCC. Il est produit par l'entreprise Kaunas pour la production de préparations bactériennes (Lituanie). Avec la variante RIF-200, le sérum du patient est dilué 200 fois afin de supprimer l'effet des anticorps antitréponémiques de groupe Le RIF-ABS est mis en place sur des lames fines bien dégraissées. Au verso des verres, 10 cercles d'un diamètre de 0,7 cm sont marqués avec un coupe-verre Dans le cercle, un antigène est appliqué sur le verre - une suspension de tréponèmes pâles - en une quantité telle qu'il y a 50- 60 d'entre eux dans le champ de vision. Les frottis sont séchés à l'air, fixés au-dessus d'une flamme et 10 min dans l'acétone. Ajouter 0,2 ml de sorbant (sonicate) et 0,5 ml de sérum sanguin du patient dans un tube séparé, bien mélanger. Le mélange est appliqué sur un frottis (antigène) de manière à le recouvrir uniformément, incubé 30 minutes en chambre humide à 3-7°C (phase II de la réaction). Après cela, le frottis est lavé avec un tampon phosphate, séché et un sérum fluorescent antishobuline y est appliqué pendant 30 minutes, placé dans une chambre humide à 37 ° C (phase II). Le médicament est lavé à nouveau avec un tampon phosphate, séché et examiné au microscope à fluorescence.Avec une réaction positive, les tréponèmes pâles émettent une lumière vert doré, avec une lumière négative, ils ne brillent pas.200 fois avec un tampon phosphate. Lors d'une réaction d'immunofluorescence avec le liquide céphalo-rachidien d'un patient atteint de syphilis du système nerveux, RIF-c et RIF-10 sont utilisés, c'est-à-dire la liqueur est introduite dans la réaction non inactivée et diluée, ou diluée au 1:10.

Test d'immobilisation de Treponema pallidum (PIT)

La réaction d'immobilisation des tréponèmes pâles (PIT) repose sur le phénomène de perte de leur mobilité en présence d'anticorps antitréponémiques immobilisants du sérum et du complément du patient dans des conditions d'anaérobiose. Comme antigène dans la réaction, une suspension de tréponèmes pâles provenant du tissu testiculaire d'un lapin infecté par une souche de laboratoire de Nichols est utilisée. La suspension est diluée avec une solution stérile de chlorure de sodium à 0,85% de manière à ce qu'il y ait 10 à 15 spirochètes dans le champ de vision.Pour effectuer la réaction, 0,05 ml de sérum sanguin du patient, 0,35 ml d'antigène et 0,15 ml de complément sont mélangé dans un tube à essai stérile. L'expérience s'accompagne de contrôles de sérum, d'antigène et de complément. Les tubes sont placés dans un anaérostat, des conditions anaérobies sont créées et maintenues dans un thermostat pendant 18 à 20 heures à une température de 35 ° C. Ensuite, des chutes de pression sont préparées à partir de chaque tube, au moins 25 tréponèmes sont comptés et combien d'entre eux sont mobiles et combien sont immobiles. Le pourcentage d'immobilisation spécifique des tréponèmes pâles est calculé par la formule : x = (A-B) / B * 100, où X est le pourcentage d'immobilisation, A est le nombre de tréponèmes mobiles dans le tube témoin, B est le nombre de mobiles tréponèmes dans le tube à essai. La réaction est considérée comme positive lorsque le pourcentage d'immobilisation est de 50 ou plus, faiblement positif - de 30 à 50, douteux - de 20 à 30 et négatif - de 0 à 20. Ovchinnikov. Les conditions anaérobies de l'expérience sont créées en plaçant le mélange réactionnel (sérum, antigène, complément) dans des melangeurs dont les deux extrémités sont fermées par un anneau en caoutchouc. La technique de la mélangerine permet de s'affranchir d'équipements et d'appareillages complexes pour créer l'anaérobiose, mais donne des résultats qui ne sont pas accessibles à la technique microaneurostatique classique.L'immobilisation des tréponèmes et les réactions d'immunofluorescence sont considérées comme les plus spécifiques dans le diagnostic sérologique de la syphilis. Et pourtant, le PIT, malgré sa spécificité, est déconseillé en pratique courante du fait de la complexité de sa mise en place.

Dosage immunoenzymatique (ELISA)

Le dosage immuno-enzymatique (ELISA) est réalisé à la fois avec un antigène kadriolipine (réaction de sélection non spécifique) et tréponémique (réaction spécifique), ce qui confirme le diagnostic de syphilis. S'il contient des anticorps contre le tréponème, un complexe antigène-anticorps se forme (phase II). Après lavage des anticorps non spécifiques non liés, du sérum d'antiglobuline conjugué à une enzyme (le plus souvent à la peroxydase de raifort) est ajouté aux puits. Le conjugué est fermement attaché au complexe antigène-anticorps (phase II).Après lavage du conjugué non lié, le substrat de coloration OFD - orthophénylènediamine (phase III) est ajouté aux puits. La réaction de la peroxydase est arrêtée par addition d'acide sulfurique. Pour le contrôle, les mêmes échantillons sont placés avec des sérums positifs et évidemment négatifs.Les résultats de l'analyse sont pris en compte à l'aide d'un photomètre qui détermine la densité optique en mode bi-onde (492 nm et 620 nm). En plus d'un photomètre, des pipettes automatiques à un et huit canaux avec une pointe en polypropylène et des ensembles appropriés de systèmes de test de diagnostic sont nécessaires pour mettre en place une réaction enzymatique-anticorps La méthode ELISA est largement utilisée dans le diagnostic sérologique de la syphilis. Il est tout aussi efficace pour détecter la maladie chez période d'incubation(1-2 semaines après l'infection), avec des manifestations cliniques de la maladie et ses formes latentes. Très souvent, ELISA est utilisé dans les examens de dépistage de la population, notamment dans les postes de transfusion sanguine.En pratique de laboratoire, la réaction d'adhésion immunitaire (RIP) et la réaction d'hémagglutination indirecte (RNHA) sont parfois également utilisées. Le premier d'entre eux repose sur le fait que les tréponèmes testiculaires pathogènes de la souche Nichols, lorsqu'ils sont mélangés au sérum du patient en présence de complément et d'érythrocytes humains, adhèrent à la surface des globules rouges. Le RNHA est largement utilisé pour diagnostiquer la syphilis en raison de sa simplicité méthodologique. Il devient positif déjà trois semaines après l'infection. Résultat positif les réactions persistent pendant des années après la guérison. Un analogue de cette réaction à l'étranger est le TRHA (hémoagglutination de Treponema pallidum).