sifilis- hronična venerična bolest koju karakteriše uzastopna promena pojedinih perioda bolesti. Bio je uzročnik sifilisa. otkrio njemački naučnik Shaudin 1905.

Morfologija i biološka svojstva. Treponema pallidum je tanka naborana nit veličine 15x0,25-0,5 µm, koja ima 8-14 ujednačenih zavoja spirale smještenih blizu jedan drugom. Teško se boji anilinskim bojama i zbog toga je dobio naziv blijeda spiroheta. Za bojenje se koristi metoda Romanovsky-Giemsa (spirohete su obojene u blijedo ružičastu boju), negativno bojenje otopinom tinte (spirohete ostaju neobojene i vidljive su na tamnoj pozadini). Za otkrivanje spiroheta u inficiranim tkivima koristi se metoda impregnacije srebrom (metoda Levaditi), u kojoj su crno obojene treponeme vidljive na pozadini žutih ćelija tkiva. U proučavanju materijala u tamnom vidnom polju, blijeda spiroheta se razlikuje od saprofitnih spiroheta koje se nalaze na sluznicama usne šupljine i genitalnih organa, ujednačenim uvojcima, glatkim valovitim pokretima.

Tanji je od ostalih treponema, može se savijati pod kutom i izvoditi karakteristične pokrete klatna. Uzročnik sifilisa se teško uzgaja u anaerobnim uslovima. Za uzgoj se koriste podloge koje sadrže zečji ili konjski serum (medije Ulengut i Tersky). Istovremeno, kulturni (dobljeni na hranjivim podlogama) sojevi spiroheta gube virulentnost i mijenjaju svoju antigensku strukturu. Treponeme sadrže endotoksin i imaju složenu antigensku strukturu.

Održivost. Blijeda spiroheta izvan tkiva pacijenta brzo umire, nestabilna je kada se osuši, djelovanje konvencionalnih dezinficijensa i visoke temperature; čak i na 40°C umire nakon 2 sata Otporniji je na niske temperature: može izdržati smrzavanje do godinu dana.

Patogenost. AT vivoŽivotinje ne dobijaju sifilis. Eksperimentalno uspijeva zaraziti majmune, zečeve, hrčke.

Patogeneza i klinika. Ulazna vrata infekcije su sluzokože i koža, koji imaju najmanje oštećenja. Period inkubacije traje u prosjeku 3-4 tjedna, nakon čega počinje primarni period sifilisa: na mjestu unošenja uzročnika javlja se blaga erozija, izdignuta iznad kože, glatkih rubova, glatkog, sjajnog dna. , ružičaste ili crvene, često bezbolne, sa gustim infiltratom u bazi, zbog čega je dobila naziv "tvrdi šankr". loše se osjećati, glavobolja. Limfni čvorovi se povećavaju, postaju gusti bez vidljivih znakova upale. Obično nisu zalemljeni za okolna tkiva. Nakon 20-30 dana, tvrdi šankr zacijeli.

Spirochetes from limfni čvorovi prodiru u krv, razmnožavaju se i ulaze u organe i tkiva i mogu uzrokovati njihovo oštećenje. Nakon 6-7 sedmica od početka bolesti razvija se sekundarni period sifilisa, karakteriziran generalizacijom procesa i pojavom obilnih i raznovrsnih osipa na koži i sluznicama (sifilida) ružičaste ili crvene boje. može se pojaviti u obliku rozeole, papula, vezikula, pustula. Ako se liječenje ne provodi, tada nakon 2-3 godine počinje treći period sifilisa - gumeni. Postoji tuberkulozni sifilis, ili duboki nodularni sifilis (subkutana guma). Gusti sferični tuberkuli pojavljuju se na koži i sluznicama. Mogu postojati neograničeno, a zatim se povući ili ulcerirati, praćeno ožiljcima. Formiranjem sifilitičke gume pojavljuje se čvor u potkožnom masnom tkivu, koji se povećava, spaja se s okolnim tkivom i kožom. Preko središnjeg dijela gume koža postaje tanja i otvara se. Guma se pretvara u gumeni čir smrad: dno mu je prekriveno nekrotičnim truljenjem. U roku od nekoliko mjeseci, čir zacijeli i na njegovom mjestu ostaje uvučeni zvjezdasti ožiljak. U posljednjem, četvrtom, parasifilističkom periodu, koji se može javiti i 10-20 godina nakon pojave bolesti, javljaju se specifične lezije centralnog nervni sistem u obliku progresivne paralize ili dorzalnih taba.

Imunitet. Ne postoji prirodni, urođeni imunitet: infekcija uvijek dovodi do razvoja bolesti. Pitanje stanja stečenog imuniteta nije u potpunosti shvaćeno. Tokom bolesti razvija se nesterilni imunitet, koji ima karakter ćelijskog, tkiva. Zove se anti-chanker, jer kada se ponovo inficira tokom bolesti, novi šankr se ne pojavljuje, a spirohete se šire po tijelu, sudjelujući u razvoju kasnijih sifilitičkih lezija.

Mikrobiološka dijagnostika. Osnovne metode laboratorijska dijagnostika- mikroskopski i serološki. U prvom periodu, mikroskopija seroznog sadržaja tvrdog šankra vrši se u tamnom polju ili u brisevima obojenim prema Romanovsky-Giemsa. Mikroskopskim pregledom se takođe podvrgavaju iscjedak kožnih lezija sekundarnog i tercijarnog perioda. Počevši od 5-6 nedelje od trenutka infekcije ili od 2-3 nedelje nakon pojave tvrdog šankra primenjuju se serološke dijagnostičke metode. Primijeniti RSK (Wassermannova reakcija) i sedimentne reakcije (reakcije taloženja) Kahna i Sachs-Vitebskyja. Wassermannova reakcija se izvodi sa pacijentovim serumom korištenjem nespecifičnih antigena (alkoholni ekstrakt lipoida iz goveđeg srca sa dodatkom holesterola, ili kardiolipin antigen), pošto se pokazalo da serumski globulini bolesnika sa sifilisom mogu kombinuje sa lipoidnim ekstraktima dobijenim iz različitih organa. Uz nepedične, koristi se i specifični antigen dobiven iz tkiva zečjeg testisa zaraženog blijedom treponemom. U odsustvu hemolize, reakcija se smatra pozitivnom, jer je očigledno da se komplement vezao za specifični sistem antigen-antitelo. Sedimentne reakcije su jednostavne u tehnici. Njihova suština leži u činjenici da kada se pacijentovom serumu doda koncentrirani lipoidni antigen, pojavljuje se zamućenje, a potom i talog. Pošto su antigeni u ovim reakcijama nespecifični, mogu biti pozitivni i u drugim slučajevima. zarazne bolesti(tuberkuloza, malarija, itd.).

najkonkretnije u serološka dijagnoza sifilis je reakcija imobilizacije treponema (RIT). Ova reakcija se zasniva na činjenici da kada se serum pacijenta sa sifilisom doda kulturi tkiva treponema (kultivisana u jajniku kunića), oni gube svoju pokretljivost u prisustvu komplementa. Uz ovu reakciju koristi se i indirektni Rif. Glavne komponente za insceniranje ove reakcije su: pacijentov serum (razblažen 1:200), soj tkiva blijede spirohete, anti-species fluorescentni serum protiv ljudskih globulina.

Jedini izvor zaraze je osoba tokom svih perioda bolesti. Put prenošenja je direktan kontakt sa pacijentom (najčešće tokom seksualnog odnosa), rjeđe putem kućnih potrepština. Moguća je prenošenje infekcije na novorođenče preko posteljice od bolesne majke.

Prevencija i liječenje. U SSSR-u, liječnici su dobili zadatak da iskorijene sifilis. Za to postoje svi preduslovi: kontinuirani rast blagostanja i kulturnog životnog standarda radnika, kao i mjere kontrole kao što su uključivanje u pregled i liječenje osoba koje su izvor zaraze i onih koje imaju bio u kontaktu sa njima, masovnim preventivnim pregledima, dispanzerskim metodama rada. Važnu ulogu u prevenciji igra rano otkrivanje izvora infekcije, blagovremeno liječenje, eliminacija promiskuiteta. Specifična profilaksa nije sprovedeno.

Za liječenje se koriste novarsenol, preparati bizmuta, žive, penicilina.

Opće karakteristike spiroheta.

Spirohetoze - Ovo je grupa zaraznih bolesti uzrokovanih spiralnim bakterijama, koje karakteriše opšta intoksikacija i ciklični razvoj vrste.

Taksonomija:

Red: Spirochaetales (od grčkog speira - kovrča, chaite - kosa)

Porodica: Spirochaetaceae, Leptospiraceae

Rod: Spirochaeta Leptospira

morfologija: dugi, tanki, spiralno zakrivljeni mikroorganizmi, veličine 0,1-0,3x5-250 mikrona. Centralna struktura je protoplazmatski cilindar, koji sadrži citoplazmu, nukleoid, 70 S ribozome i enzime, okružen citoplazmatskom membranom i ćelijskom stijenkom. Protoplazmatski cilindar ima trajni spiralni oblik zahvaljujući peptidoglikanu, formirajući primarne kovrče. Njihov broj, vrsta, nagib, ugao nagiba variraju različite vrste. Sekundarne kovrče koje nastaju kao rezultat zakrivljenosti cijelog tijela. Oko spiralnog citoplazmatskog cilindra nalazi se periplazmatski bičak (flagella), čiji je jedan kraj pričvršćen za jedan od polova protoplazmatskog cilindra, a drugi za drugi otprilike u sredini ćelije, broj flagela je od 2-100 (jedna polovina je pričvršćena za jedan stup, a druga za drugi stup). Periplazmatska flagela se spiralno omota oko protoplazmatskog cilindra, formirajući aksijalni navoj, na čijem se vrhu nalazi višeslojna vanjska membrana (spoljna ljuska spirohete); flagelum se nalazi između njega i cilindra (periplazmatski flagelum ili endoflagelum).

Razlike od enzoflagele:

stalno omotajte tijelo ćelije;

potpuno smješten unutar ćelije;

smanjuju se rotacijom oko svoje ose, translatorno i fleksijski;

zadržavaju pokretljivost u mediju sa relativno visokim viskozitetom.

Spore i kapsule se ne stvaraju. U nepovoljnim uslovima formiraju ciste kao rezultat savijanja u lopticu.

Tinktorijalna svojstva: slabo obojeni anime bojama, osim Borrelije, gram-negativnih, koristite metodu srebrenja Morozov.

Kulturna dobra: zahtjevne za hranjivim podlogama, potrebno je dodati izvorne proteine, ugljikohidrate, masne kiseline. Prema načinu skladištenja energije razlikuju se anaerobi, fakultativni anaerobi, mikroaerofili i aerobi. Optimalna temperatura za Leptospira i Borrelia je 28-30 °C.

Biohemijska svojstva : katalaza-, ureaza-, oksidaza-negativna, Voiges-Proskauerova reakcija “-”, ne smanjuju nitrate.

Otpor: zavisi od roda i vrste.

Uloga u patologiji .

Treponema su uzročnici sifilisa, čamca, pinta, bežela;

Borrelia– epidemijska i endemska povratna groznica koju prenosi krpelj, lajmska borelioza;

Leptospira- leptospiroza.

Opšti znaci spirohetoze:

ciklični tok;

otkrivanje patogena u krvi i tkivima;

glavne metode mikrobiološke dijagnostike: bakterioskopske i serološke.

2. Mikrobiologija sifilisa.

sifilis - kronična infektivna venerična bolest, koju karakterizira valoviti tok, naizmjenični periodi aktivnosti kliničke manifestacije bolesti s dugim latentnim periodima.

Istorija otkrića.

Uzročnika sifilisa su 1905. identificirali Shaudin i Hoffman i nazvali ga spirochete pallidum. Wasserman je zajedno s Keisserom i Brookom predložio serološki test za dijagnozu sifilisa.

Taksonomija.

Red Spirochaetales

Porodica: Spirochaetaceae

Rod: Treponema

Vrsta: Treponema pallidum

morfologija: bakterije u obliku spirale veličine 6-14x0,2-0,3 mikrona, broj primarnih kovrča je od 8 do 12, smještenih na jednakoj udaljenosti jedna od druge; tri periplazmatske flagele protežu se od krajeva ćelije. Oni ne stvaraju spore ili kapsule, ali u tijelu eksperimentalnih životinja mogu sintetizirati mukopolisaharidnu prirodu omotača nalik kapsuli. U nepovoljnim uslovima mogu se pretvoriti u ciste, zrnasta i sferna tela nalik cistama.

Tinktorijalna svojstva: slabo obojena anilinskim bojama, gram-negativna, prema Romanovsky-Giemsa - u blago ružičastoj boji (pallidum - blijeda), provesti metodu srebrenja prema Morozovu i negativnog kontrasta prema Burriju, najefikasnija studija u mraku - poljski ili fazno-kontrastni mikroskop.

kulturna dobra : obavezni anaerobi, hemoorganoheterotrofi, optimalna temperatura je 35°C, na temperaturama iznad 40°C gube vitalnost. Veoma zahtjevna za hranljive podloge; potrebno je dodati bubreg, moždano tkivo ili ascitičnu tečnost. Treponeme uzgojene na hranjivim podlogama (“kulturni” sojevi) postaju grublje, kraće, polimorfne, gube svoju imunogenost i patogenost. Treponeme dobro rastu bez gubitka svojih imunogenih i patogenih svojstava u testisima zečeva, u pilećim embrionima - "tkivnim" sojevima, koji se koriste za izolaciju i proučavanje patogena od pacijenata.

Biohemijska svojstva : neaktivan, razgrađuje glukozu, galaktozu, saharozu, maltozu, manitol sa stvaranjem kiseline; formiraju indol i sumporovodik, pretvaraju želatinu u tečnost; redukujte srebrni nitrat u metalik srebro, što tkaninama daje crnu ili tamno smeđu boju.

Antigenska struktura : složeni proteini vanjske membrane (termolabilni, kolabiraju na 76-80°C, polisaharidi (termostabilni); lipoproteini, koji su unakrsni antigeni uobičajeni za ljude i stoku, na primjer, kardiolipin antigen je ekstrakt lipoproteina iz srca bik, koristi se u serološkim reakcijama u dijagnostici.

faktori patogenosti :

a) toksini:

Endotoksin (LPS ćelijskog zida);

b) enzimi patogenosti nisu otkriveni;

c) strukturne i hemijske komponente ćelije:

pokretljivost zbog flagella;

adhezini;

proteini vanjske membrane.

Otpor: osjetljivi na faktore okoline, UV zračenje, sušenje, visoke temperature (na 40°C 1 sat gube svoja patogena svojstva, na 48°C umiru nakon 10 minuta); dez. otopine u radnim koncentracijama imaju štetan učinak; podnose niske temperature (na hladnoći traju do 50 dana, kada su zamrznute do 1 godine), u punoj krvi i serumu na 4°C ostaju održive 24 sata; osjetljiv na soli teških metala i antibiotike (penicilin, eritromicin, karbenicilin itd.)

Epidemiologija.

Izvor infekcije je bolesna osoba. Bakterionositeljstvo kod sifilisa se ne događa.

Način prijenosa:

1) kontakt: a) direktan; b) indirektno.

2) transplacentalni (od majke do novorođenčeta);

3) transfuzija.

Ulazna kapija: sluzokože genitalnih organa, usnoj šupljini itd., slomljena koža.

Uloga i patologije

Samo ljudi obolijevaju od sifilisa. Eksperimentalno možete zaraziti majmune, zečeve, hrčke. Kod majmuna nastaje tvrdi šankr, kod zečeva i hrčaka - generalizirana kronična infekcija.

Treponema pallidum - uzročnik sifilisa je uključen u rod Treponema (od latinskog trepo - okret, nemo - konac).

T. pallidum je otkrio F. Shaudin 1905. I. I. Mechnikov, P. Erlich, D. K. Zabolotny i drugi dali su veliki doprinos proučavanju sifilisa.

Morfologija. T. pallidum je spiralna nit dimenzija 8-18 × 0,08-0,2 mikrona sa malim, ujednačenim uvojcima. Broj kovrča 12-14. Krajevi treponema su šiljasti ili zaobljeni. Treponeme su pokretne. Imaju četiri tipa kretanja. Prema Romanovskom - Giemsa su obojene u blijedo ružičastu boju, pa se zovu T. pallidum - blijeda treponema. Loše bojenje je zbog niskog sadržaja nukleoproteina. Spirohete se mogu otkriti u preparatima obojenim Burri sa posrebrenim slojem. Osim toga, proučavaju se u živom stanju - u tamnom polju.

Uzročnici sifilisa nemaju spore i kapsule (vidi sliku 4).

uzgoj. Blijede treponeme su vrlo zahtjevne za hranljive podloge. Na umjetnim hranjivim podlogama rastu samo u prisustvu komada zečjeg mozga ili bubrega i ascitične tekućine. Raste polako, 5-12 dana na temperaturi od 35-36°C u anaerobnim uslovima. Blijede treponeme se dobro razmnožavaju u pilećem embrionu (poprečnom fisijom). Kada se uzgajaju na umjetnim hranjivim podlogama, treponeme gube svoju virulentnost. Takve kulture se nazivaju kulturnim. Kulture uzgojene u pilećim embrionima nazivaju se kulture tkiva. Obično zadržavaju virulentnost.

enzimska svojstva treponeme nemaju. Međutim, sojevi kulture se razlikuju po sposobnosti stvaranja indola i sumporovodika.

formiranje toksina. Nije instalirano.

Antigenska struktura. Blijeda treponema sadrži nekoliko antigenskih kompleksa: polisaharide, lipide i proteine. Serogrupe i serovari nisu utvrđeni.

Otpornost na faktore okruženje . Blijede treponeme su nestabilne. Temperatura od 45-55 °C ih uništava nakon 15 minuta. Otporne su na niske temperature. Kada su zamrznute, čuvaju se do godinu dana. Spirohete su osjetljive na soli teških metala (živa, bizmut, arsen itd.). Uobičajene koncentracije dezinficijensa ih ubijaju za nekoliko minuta. Osetljivi su na benzilpenicilin, bicilin itd. Pod uticajem određenih faktora sredine i antibakterijskih lekova, treponemi mogu da formiraju ciste. U ovom obliku, oni su dugo u tijelu u latentnom stanju.

Osjetljivost životinja. U prirodnim uvjetima, životinje ne obolijevaju od sifilisa. Međutim, na majmunima, kao što su pokazali I. I. Mechnikov i E. Roux, moguće je razmnožavati kliničku sliku sifilis: na mjestu uboda nastaje tvrdi šankr. Sada se pokazalo da kada su zečevi, zamorci zaraženi, čirevi se formiraju na koži na mjestu injekcije ili drugdje. Na zečevima, po prolazima, možeš dugo vrijeme spasiti izolovani soj treponema.

Izvori infekcije. Bolesnik.

Putevi prijenosa. Kontakt u domaćinstvu (direktan kontakt), pretežno seksualni kontakt. Ponekad se sifilis može prenijeti preko predmeta (posuđe, posteljina). Sa majke sa sifilisom, bolest se prenosi preko posteljice na dijete (kongenitalni sifilis).

Patogeneza. Ulazna kapija su sluzokože genitalnog trakta i usne duplje.

Primarni period - spirohete ulaze u mukoznu membranu, a nakon perioda inkubacije (prosječno 3 tjedna) na mjestu unošenja formira se čir, koji karakteriziraju guste ivice i dno - tvrdi šankr. Formiranje tvrdog šankra je praćeno povećanjem limfnih čvorova. Primarna menstruacija traje 6-7 sedmica.

Sekundarni period - uzročnici sifilisa šire se po cijelom tijelu kroz limfne i cirkulatorne puteve. Istovremeno se na koži i sluznicama stvaraju rozeole, papule i vezikule. Trajanje ovog perioda je 3-4 godine.

Treći period - razvija se kod neliječenog sifilisa. U tom periodu nastaju granulacione izrasline u organima, tkivima, kostima i sudovima - gumama ili gumastim infiltratima, sklonim propadanju. Ovaj period može trajati nekoliko godina (u latentnom obliku). Pacijent tokom ovog perioda nije zarazan. Kod neliječenog sifilisa (u nekim slučajevima), nakon mnogo godina, može doći do oštećenja centralnog nervnog sistema: sa oštećenjem mozga - progresivna paraliza, sa oštećenjem kičmena moždina- dorzalna suvoća. Ove bolesti nastaju kada se treponema lokalizira u moždanom tkivu, što dovodi do teških organskih i funkcionalnih promjena u tijelu.

Imunitet. Prirodni imunitet ne postoji. Kod sifilisa se razvija "nesterilni" infektivni imunitet. Naziva se šankr, jer se tvrdi šankr ne formira tokom ponovne infekcije, već se razvijaju svi naredni periodi. Kod sifilisa se otkrivaju IgC i IgM, kao i IgE reagini, koji u prisustvu kardiolipidnog antigena vezuju komplement.

Prevencija. Sanitetski i obrazovni rad, rano otkrivanje oboljelih od sifilisa. specifična profilaksa. Nije razvijeno.

Tretman. Penicilin, bicilin, biokinol itd.

test pitanja

1. Opišite morfologiju spirohete i metode bojenja.

2. Šta je tvrdi šankr?

3. Koji materijal za istraživanje ćete uzeti u različitim periodima sifilisa?

4. Kakav je imunitet na sifilis?

Mikrobiološka istraživanja

Svrha studije: otkrivanje blijede treponeme i serodijagnostika.

Materijal za istraživanje

1. Sadržaj tvrdog šankra (primarni period).

2. Sadržaj rozeole, papula, vezikula (sekundarni period).

3. Krv (sekundarna, treća i četvrta menstruacija).

Osnovne metode istraživanja

1. Mikroskopski.

2. Reakcija imunofluorescencije (RIF).

3. Serološki: 1) Wassermanova reakcija (RSK);

2) sedimentne reakcije.

4. Reakcija imobilizacije treponema (RIT).

Serološka dijagnoza

Wassermanova reakcija. Reakcija se postavlja po principu reakcije vezivanja komplementa (tabela 52). Razlikuje se po tome što se u Wassermanovoj reakciji može koristiti nespecifični antigen. Na primjer, lipoidni ekstrakt iz goveđeg srca je kardioantigen. Zbog nespecifičnosti antitela koja reaguju sa ovim antigenom, nazivaju se reaginima. Reakcija s nespecifičnim antigenom objašnjava se činjenicom da se povećava sadržaj globulina u krvnom serumu pacijenta i mijenja stupanj njihove disperzije. Globulini, ulazeći u kombinaciju sa lipidnim ekstraktima, formiraju kompleks koji vezuje komplement, te stoga ne dolazi do hemolize (u hemolitičkom sistemu). Odsustvo hemolize - pozitivna reakcija - serološki potvrđuje dijagnozu sifilisa. Prilikom postavljanja seroloških reakcija potrebno je koristiti i specifične antigene iz tkivnih treponema i kulturalne.

Bilješka. 1) ++++ potpuno odlaganje hemolize; - hemoliza; 2) nespecifični antigen br. 1 (lipoidna frakcija goveđeg srca); 3) specifični antigeni br. 2 i 3 pripremljeni iz kultura treponema.

Sedimentne reakcije. 1. Kahnova reakcija. Pacijentov serum se inaktivira na 56°C 30 minuta. Antigenu (ekstraktu lipida goveđeg srca) dodaje se 0,6% holesterola da bi se povećala osetljivost reakcije (tabela 53).

Obračunavanje rezultata: pojava padavina je zabilježena kao pozitivna reakcija.

2. Sachs-Vitebsky reakcija (citoholna sedimentna reakcija) je modifikacija Kahnove reakcije. Autori su koristili koncentrisaniji antigen u koji se dodaje kolesterol, što doprinosi bržem stvaranju precipitata.

Test imobilizacije treponema (RIT). Ovo je najspecifičnija reakcija u dijagnostici sifilisa.

Trenutno je razvijena metoda za ovu reakciju: suspenzija treponema se dobija iz zgnječenog testisa zeca zaraženog T. pallidum i čuva u posebnom mediju koji ne inhibira pokretljivost treponema. U epruvetu se dodaje 1,7 ml suspenzije tkivnih treponema, doda se 0,2 ml test seruma, 0,1 ml svežeg komplementa.

Kontrole: u 1. epruvetu, umjesto ispitivanog seruma, dodaje se serum zdrave osobe; u 2. - sipa se inaktivirani serum zamorac. Sve epruvete se stave u eksikator ili anaerostat, napune mješavinom plinova (1 volumen ugljičnog dioksida i 19 volumena dušika) i stave u termostat na 35°C. Zatim se ispitni materijal nanese na staklo i pokretljivost Treponema se proučava u tamnom polju. Princip reakcije je da serum bolesnika sa sifilisom u prisustvu komplementa inhibira kretanje blijede treponeme. Odredite postotak imobiliziranog treponema.

Rezultat se smatra pozitivnim ako je imobiliziranih treponema iznad 50%; slabo pozitivan - od 30-50%; negativan - ispod 20%.

test pitanja

1. Koji se materijal koristi za laboratorijsku dijagnostiku sifilisa u različitim periodima bolesti?

2. Koje su metode laboratorijska istraživanja u dijagnostici sifilisa?

3. Koje antigene treba koristiti u Wassermanovoj reakciji?

4. Koji sastojci su potrebni za izvođenje testa imobilizacije treponema (RIT)? Koji je materijal preuzet iz predmeta, šta je u njemu određeno?

T. pallidum podvrsta pallidum - spiralna bakterija veličine 6-14x0,2-0,3 mikrona; kulture mogu biti velike veličine. Kovrče spirale su iste, ali po visini, može ih biti do 14. U stanju su da formiraju L-oblik.

Basic kako se sifilis širi- poprečna podjela. Uzročnik sifilisa nestabilan tokom spoljašnje okruženje i umire kada se osuši, ali na hladnoći traje do 50 dana. Zagrijavanje na temperaturi od 40 ° C u trajanju od sat vremena dovodi do gubitka patogenih svojstava; na 48 °C bakterije umiru u roku od 10 min.

Uzročnik sifilisa slabo obojena anilinskim bojama (otuda naziv "blijeda spiroheta"). bakterije sifilisa redukujte srebrni nitrat u metalik srebro, što tkaninama daje crnu ili tamno smeđu boju.

U domaćoj praksi uobičajena je metoda srebrenja prema Morozovu. Prema Romanovsky-Giemsi, postaje ružičasta i nepatogena treponema- u ljubičastoj ili plavoj boji. Također se koristi Burri negativno bojenje.

Kulturološka svojstva sifilisa. Kultura uzročnika sifilisa

Blijeda spiroheta zahtjevan za uslove uzgoja, slabo raste na umjetnim podlogama; metode za stabilnu proizvodnju kultura još nisu dostupne.

U našoj zemlji najveći broj sojevi sifilisa identificirali kazanski mikrobiolozi V.M. Aristovski i P.P. Geltzer.

ovi "Kazanj" sojevi sifilisa zajedno sa Reiterovim sojem, koriste se za proizvodnju Ag za serodijagnostiku. Sa dugotrajnim uzgojem bakterije sifilisa prilagođavaju se jednostavnijim sredinama (na primjer Kitta-Tarozzi) i gube svoja patogena svojstva.

Kolonije sifilisa male, pojavljuju se 3-5. dana uzgoja.

Sadržaj članka

Blijeda treponema

Morfologija i fiziologija

T.pallidum ima spiralni oblik, protoplastični cilindar, koji je uvijen u 8-12 vijuga. Od krajeva ćelije protežu se 3 periplazmatske flagele. Blijeda treponema ne percipira dobro anilinske boje, pa je obojena bojom Romanovsky-Giemsa. Međutim, najviše efikasan metod je njegovo proučavanje u mikroskopu tamnog polja ili fazno-kontrastnog mikroskopa. Mikroaerofil. Ne raste na umjetnim hranjivim podlogama. T. pallidum se uzgaja u tkivu testisa kunića, gdje se dobro razmnožava i u potpunosti zadržava svoja svojstva, izazivajući orhitis kod životinje. Antigeni. Antigenska struktura T. pallidum je složena. Povezuje se sa proteinima vanjske membrane, lipoproteinima. Potonji su unakrsno reaktivni antigeni uobičajeni za ljude i velike goveda. Koriste se kao antigen u Wassermannovom testu za serodijagnostiku sifilisa.

Patogenost i patogeneza

Faktori virulencije Treponema pallidum uključuju proteine ​​vanjske membrane i LPS, koji pokazuju svoja toksična svojstva nakon oslobađanja iz stanice. U isto vrijeme, očigledno, sposobnost treponema da formira zasebne fragmente tokom podjele, prodiru duboko u tkiva, također se može pripisati faktorima virulencije. Postoje tri faze u patogenezi sifilisa. Kod primarnog sifilisa uočava se formiranje primarnog žarišta - tvrdog šankra na mjestu ulaznih vrata infekcije, nakon čega slijedi prodor u regionalne limfne čvorove, gdje se patogen umnožava i akumulira. Primarni sifilis traje oko 6 sedmica. Drugi stupanj karakterizira generalizacija infekcije, praćena prodiranjem i cirkulacijom patogena u krvi, što je praćeno osipom na koži. Trajanje sekundarnog sifilisa kod neliječenih pacijenata kreće se od 1-2 godine. U trećoj fazi nalaze se infektivni granulomi (desno meso sklono propadanju), lokalizovani u unutrašnjim organima i tkivima. Ovaj period kod neliječenih pacijenata traje nekoliko godina i završava se oštećenjem centralnog nervnog sistema (progresivna paraliza) ili kičmene moždine (tasca dorsalis).

Imunitet

Kod sifilisa postoji humoralni i ćelijski imuni odgovor. Nastala antitijela nemaju zaštitna svojstva. Ćelijski imunološki odgovor povezan je s fiksacijom patogena i stvaranjem granuloma. Međutim, ne dolazi do eliminacije treponema iz organizma. Istovremeno, nepovoljni uslovi okoline izazivaju stvaranje cista od strane treponema, koje su lokalizovane u zidu. krvni sudovi. Vjeruje se da to ukazuje na prijelaz bolesti u fazu remisije. Zajedno sa cistama, treponemi formiraju L-oblike. Kod sifilisa nastaje HNL, što se može otkriti kožno-alergijskim testom s mrtvom suspenzijom treponema. Vjeruje se da je manifestacija tercijarnog perioda sifilisa povezana s HNL-om.

Ekologija i epidemiologija

Sifilis je tipična antroponotska infekcija. Razboljevaju se samo ljudi koji su u prirodi rezervoar zaraze. Prenos infekcije se događa spolnim putem i mnogo rjeđe - kroz donje rublje i druge predmete. U vanjskom okruženju (vazduh), treponema brzo umire.

Sifilis i druge treponematoze

Sifilis je hronična infektivna venerična bolest osobe, ima ciklički progresivni tok, zahvata kožu, sluzokožu, unutrašnje organe i nervni sistem. Uzročnik bolesti je Treponema pallidum.Postoje tri glavna perioda u razvoju sifilisa čije laboratorijske dijagnostičke metode imaju svoje karakteristike. U ranom periodu bolesti materijal za laboratorijsku dijagnostiku je izolacija iz tvrdog šankra, punktat iz limfnih čvorova, struganje od rozeole, sifilisa i sl. U sekundarnom i tercijarnom periodu se ispituje krvni serum i likvor.S obzirom da je izolacija čiste kulture treponema u konvencionalnim bakteriološkim laboratorijama nemoguća, u primarnom periodu bolesti (ređe kasnije) koristi se bakterioskopska dijagnostička metoda. izvedeno. Počevši od sekundarnog perioda, uglavnom se koriste serološke metode.

Bakterioskopsko istraživanje

Prije uzimanja patološkog materijala, prvo obrišite sifilitični čir pamučnim štapićem kako biste uklonili masni plak i kontaminirajuću mikrofloru. Zatim se dno tvrdog šankra iritira skalpelom ili metalnom lopaticom, ili se čir snažno stisne sa strana prstima u gumenoj rukavici kako bi se izlučio eksudat rane. Uz malu količinu bistre tečnosti može se dodati u kap 0,85% rastvora natrijum hlorida. Ukoliko je nemoguće uzeti materijal sa dna šankra (fimoza, ožiljci čira i sl.), punktiraju se regionalni limfni čvorovi.tamno vidno polje (bolje!), ili uz pomoć fazno-kontrastnog ili anoptralnog mikroskopa Blijeda treponema u tamnom vidnom polju izgleda kao blago sjajna tanka nježna spirala sa strmim ujednačenim zaobljenim primarnim uvojcima. Pokreti su glatki, tako da se savija pod uglom. Ali oscilacije poput klatna, koje su posebno karakteristične za njega. Uzročnika sifilisa treba razlikovati od Treponema refringens (koja kolonizuje vanjske genitalije), koja je deblja, grublja, s nepravilnim velikim kovrčama i ima aktivne nestalne pokrete, ali se ne savija. Fuzosp-irohetozne simbiozne treponeme odlikuju se tankim uzorkom, blagim kovrčama i nepravilnim kretanjem.Prilikom dijagnosticiranja oralnog sifilisa treba razlikovati i blijedu treponemu od dentalnih treponema, posebno T. dentium, kao i od T. buccalis. Prvi od njih općenito je teško razlikovati od sifilitičnog. Istina, kraći je, ima 4-8 oštrih uvojaka, nema pokreta klatna. T. buccalis je deblji, ima grube početne kovrče i neredovito kretanje.U slučaju bilo kakve sumnje, treba imati na umu da se sve saprofitne treponeme, za razliku od bledih, dobro boje anilinskim bojama. Ne prodiru u limfne čvorove, pa je proučavanje punkcija od velike dijagnostičke vrijednosti. Otkrivanje tipičnih treponema u punktatu limfnih čvorova neupitno potvrđuje dijagnozu sifilisa. Njegove prednosti su u tome što se materijal brzo ispituje, a najkarakterističnija je morfologija treponema u živom stanju. Više se ne koriste mrlje tinte po Burri metodi.Ako nije moguće provesti istraživanje u tamnom vidnom polju, mogu se koristiti različite metode bojenja. Blijeda treponema ne percipira dobro anilinske boje. Od mnogih predloženih metoda bojanja vrhunski rezultati dobijeno korišćenjem boje Romanovkim-Giemsa. Napravljeni brisevi se fiksiraju metil alkohol ili u mešavini Nikiforova. Rezultati jasnoće se dobijaju kada se boja Romanovsky-Giemsa ulije u preparat. Da biste to učinili, fragmenti šibica stavljaju se u Petrijevu posudu, na njih se stavlja stakalca s namazom prema dolje i boja se sipa dok ne navlaži razmaz. Vrijeme bojenja je udvostručeno. Blijede treponeme pod mikroskopom imaju blijedoružičastu boju, dok ostale vrste treponema postaju plave ili plavoljubičaste.Može se koristiti i Morozovljeva metoda srebrenja. Treponeme u potpunosti zadržavaju svoje morfološke karakteristike i pod mikroskopom izgledaju smeđe ili gotovo crne. Ali posrebreni preparati se ne čuvaju dugo. U posljednje vrijeme rijetko se koriste metode bojenja treponeme.Ako se sifilis liječi kemoterapijskim lijekovima, gotovo je nemoguće identificirati patogena u patološkim materijalima čak i uz pomoć tamnog vidnog polja. Po prijemu negativne analize, ona se mora ponoviti.

Serološka dijagnoza sifilisa

Prilikom provođenja seroloških reakcija sada se koriste sljedeće istraživačke metode ujedinjene u Ukrajini: reakcija fiksacije komplementa (RCC), imunofluorescencija (RIF), imobilizacija treponema (PIT), mikroreakcija precipitacije (MPR) i enzimski imunotest (ELISA). Dugi niz godina, glavnom i najčešćom reakcijom se smatrala reakcija fiksacije komplementa ili Wassermanova reakcija (RV, RW). Za njeno postavljanje koristi se krvni serum bolesnika sa sifilisom i cerebrospinalna tečnost u slučaju oštećenja nervnog sistema.Način postavljanja Wassermanove reakcije se ne razlikuje od tehnike provođenja RSC. Jedina razlika je u tome što se za RO ne koristi samo specifični treponemski, već i nespecifični kardiolipin antigen.Iz kubitalne vene se uzima 5-10 ml krvi na prazan želudac ili ne ranije od 6 sati nakon obroka. Nemojte vaditi krv od pacijenata sa povišena temperatura, nakon konzumiranja alkohola i masne hrane, kod trudnica 10 dana pre porođaja i porodilja. Serum ekstrahovan iz krvi se zagrijava na temperaturi od 56°C 30 minuta da inaktivira vlastiti komplement. RO se obavezno postavlja sa dva antigena: specifičnim i nespecifičnim Specifični ultrazvučni treponemski antigen se priprema iz kultura blijede treponeme (Reiterov soj) uzgojenih u epruvetama i izloženih ultrazvuku. Proizvodi se u obliku liofiliziranog praha. Nespecifični kardiolipin antigen se dobija alkoholnom ekstrakcijom lipida iz goveđeg srca i prečišćavanjem iz balastnih smeša, pakovanih u ampule od 2 ml. Za uvođenje antigena u RO, on se titrira prema ovim uputstvima. Neposredno prije postavljanja RV provodi se titracija komplementa i hemolitičkog seruma po istoj shemi kao u RSK. Wassermanova reakcija je postavljena i kvalitativno i kvantitativno. Kvalitativna reakcija se izvodi u tri epruvete sa dva antigena prema uobičajenoj shemi Rezultati reakcije se ocjenjuju po sistemu 4 plus: pozitivna reakcija - kada dođe do potpunog ili značajnog kašnjenja hemolize (4 +, 3 +); slabo pozitivna reakcija - djelomično odlaganje hemolize (2+); sumnjiva reakcija - blago kašnjenje u hemolizi (1+). U slučaju potpune hemolize RO se smatra negativnim.Svaki serum koji je dao pozitivnu kvalitativnu reakciju mora biti ispitan i kvantitativnom metodom sa svojim uzastopnim razblaženjem od 1:10 do 1:640.koji dolazi kompletan (4+) ili značka (3+) kašnjenje hemolize. Kvantitativna metoda postavljanja RO ima važnost za procjenu efikasnosti liječenja sifilisa. Brzo smanjenje titra reagina ukazuje na uspješnu terapiju. Ako se titar seruma ne smanjuje duže vrijeme, to ukazuje na nedostatak djelotvornosti primijenjenih lijekova i potrebu za promjenom taktike liječenja.Kada pylori za seronegativni primarni sifilis ili latentni, tercijarni ili kongenitalni, preporučuje se stavljanje Wassermanova reakcija na hladnom prema istoj shemi. U slučaju sumnje na neurosifilis, RO se provodi sa cerebrospinalnu tečnost, koji je inaktiviran jer ne sadrži vlastiti komplement. U reakciju se uvodi nerazrijeđen likvor i to u razrjeđenjima 1:2 i 1:5. Wassermanova reakcija postaje pozitivna 2-3 sedmice nakon pojave tvrdog šankra. Kod sekundarnog sifilisa pozitivan je u 100% slučajeva, kod tercijarnog - u 75%.Osim toga, u kompleksu seroloških reakcija (CSR) kao skrining test koristi se reakcija mikroprecipitacije sa krvnom plazmom ili inaktiviranim serumom.

Mikroreakcija precipitacije

Mikroreakcija precipitacije stavljena sa kardiolipinskim antigenom. Princip reakcije je da kada se emulzija antigena kardiolipina doda u krvnu plazmu ili serum bolesnika sa sifilisom, nastaje precipitat (kompleks antigen-antitijelo) koji se taloži u obliku pahuljica. bijele boje. Ova tehnika se koristi: tri kapi plazme (ili inaktiviranog seruma) pipetiraju se u jažicu ploče, zatim se dodaje jedna kap emulzije standardnog kardiolipin antigena. Reakcione komponente se mešaju mućkanjem ploče 5 minuta, nakon čega se dodaju tri kapi 0,9% rastvora natrijum hlorida i ostavljaju na sobnoj temperaturi još 5 minuta. Obavezna kontrola sa slabo pozitivnim krvnim serumom. Rezultati se procjenjuju golim okom preko izvora umjetne svjetlosti. Kada se u bušotini pojave velike pahuljice, reakcija se smatra pozitivnom (4 +, 3 +), srednjom i malom - kao slabo pozitivnom (2 +, 1 +). At negativan rezultat precipitat se ne formira.Precipitaciona mikroreakcija se može sprovesti i kvantitativnom metodom da bi se utvrdio titar precipitirajućih antitela i na osnovu toga procenila efikasnost tretmana. Viši titri MRP se dobijaju sa plazmom nego sa serumom. U inostranstvu, analog MRP-a sa serumom pacijenata je VDRL (Laboratorija za istraživanje veneričnih bolesti), a sa plazmom - RPR (Rapid plazma reagin).

Reakcija imunofluorescencije (RIF)

Grupa specifičnih reakcija koje se široko koriste za serološku dijagnostiku sifilisa uključuje reakciju indirektne imunofluorescencije. Kao antigen koristi suspenziju patogene blijede treponeme Nichols soja iz parenhima zečjih testisa 7. dana nakon infekcije. Reakcija je stavljena u dvije modifikacije: RIF-ABS i RIF-200. U prvoj varijanti koristi se sorbent antitijela (sonicat) - ultrazvučni treponemski antigen za CSC. Proizvodi ga poduzeće iz Kaunasa za proizvodnju bakterijskih preparata (Litvanija). Kod RIF-200 varijante serum pacijenta se razblažuje 200 puta kako bi se uklonio efekat grupnih antitreponemskih antitela.RIF-ABS se postavlja na tanke, dobro odmašćene stakalce. Na poleđini čaša staklorezačem je označeno 10 krugova prečnika 0,7 cm.Unutar kruga se na staklo nanosi antigen - suspenzija bledih treponema - u tolikoj količini da ima 50- Njih 60 u vidnom polju. Razmazi se suše na vazduhu, fiksiraju na plamenu i 10 min u acetonu. Dodajte 0,2 ml sorbenta (sonikat) i 0,5 ml pacijentovog krvnog seruma u posebnu epruvetu, dobro promiješajte. Smjesa se nanosi na razmaz (antigen) tako da ga ravnomjerno pokrije, inkubira 30 minuta u vlažnoj komori na 3-7°C (II faza reakcije). Nakon toga, bris se ispere fosfatnim puferom, osuši i na njega se nanese antišobulin fluorescentni serum na 30 minuta, stavi u vlažnu komoru na 37°C (faza II). Lijek se ponovo ispere fosfatnim puferom, osuši i pregleda pod fluorescentnim mikroskopom.Uz pozitivnu reakciju blede treponeme emituju zlatno-zelenu svetlost, sa negativnom ne svetle.200 puta sa fosfatnim puferom. Prilikom provođenja imunofluorescentne reakcije sa cerebrospinalnom tekućinom pacijenta sa sifilisom nervnog sistema koriste se RIF-c i RIF-10, tj. tekućina se uvodi u reakciju neinaktivirana i razrijeđena, ili razrijeđena 1:10.

Treponema pallidum test imobilizacije (PIT)

Reakcija imobilizacije bledih treponema (PIT) zasniva se na fenomenu gubitka njihove pokretljivosti u prisustvu imobilizujućih antitreponemskih antitela seruma i komplementa pacijenta u uslovima anaerobioze. Kao antigen u reakciji koristi se suspenzija blijedih treponema iz tkiva testisa zeca zaraženog laboratorijskim sojem Nicholsa. Suspenzija se razblaži sterilnim 0,85% rastvorom natrijum hlorida tako da u vidnom polju bude 10-15 spiroheta.Za izvođenje reakcije uzima se 0,05 ml krvnog seruma pacijenta, 0,35 ml antigena i 0,15 ml komplementa. pomešano u sterilnoj epruveti. Iskustvo je popraćeno kontrolama seruma, antigena i komplementa. Epruvete se stavljaju u anaerostat, stvaraju se anaerobni uslovi i drže u termostatu 18-20 sati na temperaturi od 35°C. Zatim se iz svake epruvete pripremaju padovi pritiska, izbrojava se najmanje 25 treponema i koliko ih su pokretni, a koliko nepokretni. Procenat specifične imobilizacije bledih treponema izračunava se po formuli: x = (A-B) / B * 100, gde je X procenat imobilizacije, A je broj mobilnih treponema u kontrolnoj epruveti, B je broj pokretnih treponema u epruveti. Reakcija se smatra pozitivnom kada je postotak imobilizacije 50 ili više, slabo pozitivnom - od 30 do 50, sumnjivom - od 20 do 30 i negativnom - od 0 do 20. Ovchinnikov. Anaerobni uslovi eksperimenta se stvaraju stavljanjem reakcione smeše (serum, antigen, komplement) u melanžere, čija su oba kraja zatvorena gumenim prstenom. Melanžerinska tehnika omogućava da se izbegne složena oprema i aparati za stvaranje anaerobioze, ali daje rezultate koji nisu dostupni klasičnoj mikroaneurostatičkoj tehnici.Reakcije imobilizacije treponema i imunofluorescencije smatraju se najspecifičnijim u serološkoj dijagnostici sifilisa. Pa ipak, PIT se, uprkos svojoj specifičnosti, ne preporučuje za upotrebu u širokoj praksi zbog složenosti podešavanja.

Enzimski imunotest (ELISA)

Enzimski imunosorbentni test (ELISA) se provodi i sa kadriolipinskim antigenom (nespecifična, selekcijska reakcija) i treponemskim (specifična reakcija), čime se potvrđuje dijagnoza sifilisa.test serum. Ako sadrži antitijela protiv treponema, formira se kompleks antigen-antitijelo (faza II). Nakon ispiranja nevezanih nespecifičnih antitijela, u jažice se dodaje antiglobulinski serum konjugiran sa enzimom (najčešće peroksidazom hrena). Konjugat je čvrsto vezan za kompleks antigen-antitelo (faza II).Nakon ispiranja nevezanog konjugata, u jažice se dodaje OFD supstrat za bojenje - ortofenilendiamin (faza III). Reakcija peroksidaze se zaustavlja dodavanjem sumporne kiseline. Za kontrolu se stavljaju isti uzorci sa pozitivnim i očigledno negativnim serumima.Rezultati analize se uzimaju u obzir pomoću fotometra koji određuje optičku gustoću u dvotalasnom režimu (492 nm i 620 nm). Pored fotometra, potrebne su jedno- i osmokanalne automatske pipete sa polipropilenskim vrhom i odgovarajući set dijagnostičkih test sistema za postavljanje enzimske reakcije antitijela.ELISA metoda ima široku primjenu u serološkoj dijagnostici sifilisa. Jednako je efikasan u otkrivanju bolesti u period inkubacije(1-2 sedmice nakon infekcije), sa kliničkim manifestacijama bolesti i njenim latentnim oblicima. Vrlo često se ELISA koristi u skrining pregledima stanovništva, posebno na stanicama za transfuziju krvi.U laboratorijskoj praksi ponekad se koriste i reakcija imunološke adhezije (RIP) i reakcija indirektne hemaglutinacije (RNHA). Prvi od njih se zasniva na činjenici da se patogeni treponemi testisa Nicholsovog soja pomiješaju sa serumom pacijenta u prisustvu komplementa i ljudskih eritrocita, prianjaju na površinu crvenih krvnih stanica. RNHA se široko koristi za dijagnosticiranje sifilisa zbog svoje metodološke jednostavnosti. Pozitivan postaje već tri sedmice nakon infekcije. Pozitivan rezultat reakcije ostaju godinama nakon oporavka. Analog ove reakcije u inostranstvu je TRHA (Treponema pallidum hemoaglutinacija).